靶向FaBI的抗菌药物筛选模型的初步研究

来源 :上海师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shiguanghuai
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烯脂酰-ACP还原酶(FabI)是大部分细菌脂肪酸合成所必需的酶,是一种NADH依赖型单功能酶,而真核细胞中没有此酶,它已逐渐成为抗菌药物研究的热点靶位。本文利用反义RNA技术,构建了能够有效抑制FabI表达的工程菌(E.coli/pHNF)。   利用上述的工程菌,构建了FabI靶点超敏全细胞抗菌药物筛选模型。考察了诱导条件对其反义沉默效果的影响,并以三氯生和氨苄西林分别作为阳性及阴性对照,通过酶标仪检测,初步确定了FabI靶点特异性全细胞筛选模型的条件是:诱导剂IPTG浓度为37.5μmol/L、阳性对照三氯生浓度为25、37.5、50μg/mL,阴性对照氨苄西林浓度为0.5、2.5、5μg/mL,培养时间为16小时。   将此模型用于植物内生真菌发酵样品的初筛,共筛选样品5847个,其中阳性样品为559个,阳性率为9.7%。选择其中活性较高的HCCB06314菌株进行进一步研究,通过观察菌株的宏观和显微形态、培养特征以及分析ITS序列PCR结果,对HCCB06314进行分类鉴定,确定该菌株属于镰孢菌属(Fusarium sp)。   对菌株HCCB6314的代谢产物进行研究,通过硅胶层析和HPLC方法分离纯化得到2个次级代谢产物,利用质谱和核磁共振波谱对其进行结构鉴定,确定HCCB06314-1为恩镰孢菌素Ⅰ(EnniatinⅠ),HCCB06314-2为恩镰孢菌素H。采用UPLC-MS对样品6314-10进行分析,该样品存在7个恩镰孢菌素类(enniatins)化合物,其中分子式为C37H65N3O9的化合物,通过scinfinder检索,未能查到相关enniatin类似物,可能为一个新的enniatin类似物。  
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