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本论文包括硕博连读期间的两个研究项目,分别围绕HBoV1感染性克隆的构建和HBoV1对天然免疫的调节展开。第一部分,我们成功构建了插入了EGFP基因的全长HBoV1感染性克隆(pIHBoV1wh-GFP)。感染性克隆的构建,是开展基础病毒学研究的基础工作。在这篇文章中,我们首先构建了武汉株博卡病毒的感染性克隆pIHBoV1wh。并验证了pIHBoV1wh在HEK293T细胞中转录、复制和产生病毒粒子的能力。同时,我们构建了插入了EGFP基因的全长HBoV1克隆pIHBoV1wh-GFP。pIHBoVwh-GFP能够在转染的HEK293T细胞中转录、翻译、复制和产生子代病毒(HBoV1wh-GFP),并且包装的病毒基因组是全长的。由于EGFP蛋白高度灵敏,易于检测,因此为寻找新的易感宿主提供了有力工具。同时,可以作为转基因治疗的载体,携带更大的基因,用于治疗肺部疾病。第二部分,我们证明了HBoV1 NS1、NS1-70蛋白可以抑制NF-κB信号通路的激活。HBoV1属于细小病毒科,是在世界范围内引起婴幼儿急性呼吸道感染的单链DNA病原体。NF-κB转录因子通过激活许多生理过程在入侵病毒的清除中发挥关键作用。以前的研究表明,HBoV1感染可以显著上调TNF-α的水平,而TNF-α是NF-κB信号通路的强刺激物。我们这篇文章主要探索HBoV1蛋白是否调节TNF-α介导的NF-κB信号通路激活。我们发现HBoV1 NS1和NS1-70蛋白抑制TNF-α刺激的NF-κB激活。NS1和NS1-70蛋白可以抑制TNF受体相关因子2(TRAF2)、IκB激酶α(IKKα)、IκB激酶β(IKKβ)、IKKβ持续性激活型突变体(IKKβSS/EE)或p65-诱导的NF-κB激活。此外,NS1和NS1-70不抑制TNF-α介导的IκBα磷酸化和降解,也不抑制p65的入核。免疫共沉淀实验证实NS1和NS1-70与p65的相互作用。值得注意的是,NS1抑制TNF-α介导的p65 ser536位点磷酸化,而NS1-70不抑制。我们的研究结果揭示HBoV1 NS1和NS1-70蛋白抑制NF-κB激活。我们证明HBoV1可以抑制NF-κB信号通路激活,为揭示HBoV1的免疫逃避机制,探索其致病性提供了重要依据。