【摘 要】
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山羊一直以来都是一种重要的家养动物。生产基因修饰的山羊,以提高它们的生产性状、抵抗疾病的能力、并产生有价值的高品质的蛋白质,被广泛应用于农业和生物制药领域。然而,传统
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山羊一直以来都是一种重要的家养动物。生产基因修饰的山羊,以提高它们的生产性状、抵抗疾病的能力、并产生有价值的高品质的蛋白质,被广泛应用于农业和生物制药领域。然而,传统转基因技术对外源基因的低效率控制,导致外源基因的表达效率极低,从而极大地限制了转基因山羊的应用。 胚胎干细胞(ESC)已被证明是基因打靶所必不可少的。在小鼠胚胎干细胞基础上产生的基因打靶技术,允许产生具有精确和高效的基因敲除的和定点插入的小鼠。至目前为止,已产生胚胎干细胞只有少数几个品种,包括小鼠,人类,恒河猴和大鼠。然而,山羊和其他有蹄类动物由于其胚胎干细胞的鉴定和培养条件知识的贫乏,这些物种的干细胞胚胎很难从其胚胎分离和维持。因此,虽然在过去的几十年中,就获得山羊胚胎干细胞已经做过很多的努力,但是到目前尚没有真正的山羊胚胎干细胞系报道建立。 目前,多能性已被证明可以通过加入外源因子的方式,对体细胞进行重新编程而获得。更重要的是,基因改造后的iPS细胞已被证明可以在体内通过生殖系传递到下一代,这意味着iPS细胞可以替代ES细胞用来产生转基因动物。近年来iPS细胞已从许多物种,包括小鼠,人类,恒河猴,大鼠和猪产生。大鼠iPS细胞是在ES细胞系报告之前产生的第一株多能干细胞系。这是iPS细胞的技术可以被应用到ES细胞系难以建立的物种的原理证明。 山羊胚胎干细胞系将有助于产生精确的基因修饰山羊。迄今为止从早期胚胎获得山羊的胚胎干细胞的努力,都没有成功。我们通过使用8个确定的因子,可以直接重新编程山羊体细胞为多能性细胞。我们的观察表明,山羊的体细胞是更难以被比来自其他物种的体细胞重新编程。我们的研究证明,山羊iPS细胞表达胚胎干细胞标记物,包括碱性磷酸酶,Oct3/4,Nanog,Sox2,REX1,SSEA-1,的Tra-1-60,TRA-1-81和CDH1。山羊的iPS细胞具有正常的核型,在胚状体和畸胎瘤实验中能够分化为所有三种胚层。我们的研究将有助于揭示山羊多能性干细胞的性质,并提供一种系统,来筛选山羊ES细胞的培养条件。此外,可以直接使用山羊iPS细胞产生精确的基因改造山羊。
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