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[目的]体外培养树鼩神经干细胞,并对其传代。研究体外培养树鼩神经干细胞的可行性,并观察树鼩神经干细胞体外培养的神经生物学特性。为今后研究营养性疾病引起的脑部疾病打下基础。[方法]应用加有B27添加剂、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液对新生树鼩海马部脑细胞进行细胞体外培养,并进行传代。于倒置显微镜下观察其生长情况及形态变化,并采用免疫细胞组织化学染色及免疫细胞荧光测定的方法对培养细胞的巢蛋白Nestin抗原进行鉴定。培养出的细胞在仅加有10%血清的培养液中进行定向诱导分化培养,并于倒置显微镜下观察分化情况及分化细胞形态,7d后对分化的细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE).微管相关蛋白(MAP-2)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗原的免疫细胞组织化学染色及免疫细胞荧光测定。探讨新生树鼩神经干细胞冻存后复苏能力,收集培养得到的增殖活跃的原代或传代的神经干细胞,加入NSCs冻存液(10%DMSO+90%细胞完全培养液),调整细胞密度移入冻存管,于液氮中冻存,而后进行细胞复苏培养。[结果]从新生树鼩海马分离的细胞可连续传代和不断增殖形成神经球,镜下可见细胞呈悬浮状态生长,神经球体积逐渐变大,说明细胞可不断增殖。原代神经球经分散成单个细胞传代培养过程中,仍出现与原代培养相同的大量子代神经球。神经球行标记性蛋白Nestin免疫细胞化学染色后神经球细胞胞浆呈棕黄色,表达阳性；行Nestin免疫细胞荧光检测,荧光显微镜下可见神经球显示红色荧光,表现出Nestin阳性。培养出的神经球在含血清培养液中具有多向分化能力,分化出的细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白(MAP-2)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色及免疫细胞荧光鉴定均表达阳性,而完全分化后的神经球表达Nestin阴性。说明培养的细胞具有可分化为神经元细胞和星形胶质细胞的能力。神经干细胞冻存后复苏细胞的存活率仅约30%左右,但冻存后仍存活的树鼩神经干细胞可以保持其特性。[结论]从新生树鼩海马区分离的细胞经鉴定为神经干细胞。培养的细胞具有自我更新、不断增殖及多向分化能力；并能在含血清培养液中可分化成神经元细胞和星形胶质细胞。本实验的细胞培养方案可以用于树鼩的神经干细胞体外培养,但复苏方法有待改进。