猪链球菌（Streptococcus suis）是一种重要的人畜共患病原,能引起人脑膜炎、中毒性休克综合征等临床症状,威胁公共卫生安全;也能引起猪脑膜炎、关节炎等疾病,对养猪业造成较大的经济损失。S.suis逃避宿主免疫防御机制是其致病的关键环节之一。为研究猪链球菌的小鼠感染模型,本实验室此前将一株9型S.suis DN13在小鼠体内连续传代,获得了对小鼠毒力极大增强的菌株。在本研究中以传代获得的强毒菌株在小鼠中研究S.suis的致病机理。从DN13传代后细菌第10代、20代和30代中各随机挑选一个单菌落（分别命名为SS9-P10、SS9-P20和SS9-P30）,并测定了对ICR小鼠中LD50数值。结果发现这3个传代菌株毒力比较接近,LD50均在104CFU数量级,而亲本株DN13 107CFU攻毒对小鼠不致死。为了阐明传代菌株毒力增强的分子机理:（1）我们对3个不同代次的传代菌株SS9-P10、SS9-P20、SS9-P30和亲本菌株DN13进行了生物学表型比较研究,结果显示3个传代菌株比亲本菌株DN13抗氧化和高温应激能力、生物被膜形成能力均显著增高（P<0.05）,但3个传代菌株间无明显差异;（2）对SS9-P10、SS9-P20和SS9-P30进行全基因组重测序发现相对于DN13的突变位点分别为150、155和153个,其中138个突变位点存在于在3个不同代次的传代菌株,表明在3个传代菌株中基因突变情况高度相似（89%,138/155）。考虑到3个传代菌株生物学表型和基因突变均高度相似,我们推测传代菌株生物学表型改变与传代菌株中共有的138个突变位点有关。进一步对138个突变位点分析显示,编码区和非编码区分别有58个和1个非沉默突变,假基因中5个突变导致阅读框功能恢复。在编码区的58个突变中,DNA连接酶编码基因中36 bp重复序列的删除,Methyl methane sulfonate敏感性试验显示突变前后DNA连接酶活性无明显差异。而非编码区中假定蛋白（A6M16＿09815）启动子-10区域的突变,CAT assay表面启动子在突变后活性增强。DN13中假基因XRE家族转录调节因子（srtR）的突变,导致阅读框延迟终止,恢复完整的阅读框。文献报道XRE家族转录调节因子可能与抗应激相关,在DN13中通过质粒互补功能型srtR后,发现重组菌株对H2O2敏感性降低,提示srtR参与抗氧化应激。为进一步研究srtR是否与抗应激有关,我们分别在DN13和SS9-P10中构建srt R基因缺失和互补菌株。与预期一致,含功能型的srtR的菌株对H2O2和高温应激（42℃）耐受性性显著高于srtR缺失菌株。在小鼠感染模型中,含功能型的SrtR的菌株致病力强于相同背景的SrtR缺失菌株。上述结果表明,SrtR参与S.suis抗氧化和高温应激,也在S.suis致病过程发挥作用。为研究SrtR感应氧化应激的机制,常见于感受氧化应激的半胱氨酸Cys（SrtR中唯一一个Cys位于功能未知的DUF3955结构域）分别突变为丙氨酸Ala（SrtRC105A）和丝氨酸Ser（SrtRC105S,即-SH变为-OH）,结果SrtRC105A抗氧化应激调节能力完全丧失而SrtRC105S抗氧化调节活性与野生型SrtR相当,表明SrtR可能不是通过Cys的巯基的氧化和还原感受氧化压力。另外,DUF3955结构域中最保守的区域位于第120-132位氨基酸处,对其中8个保守位点分别进行点突变,发现SrtRN125A和SrtRP130A无抗氧化应激调节活性,而SrtRG132A抗氧化应激调节活性增强,但这些关键氨基酸位点如何影响SrtR功能仍待进一步研究。为探究SrtR调节哪些基因参与抗氧化应激应答,我们通过qRT-PCR分析了H2O2处理后直接抗氧化应激的基因的转录水平。我们发现Fe2+结合蛋白基因编码基因dpr、超氧化物歧化酶编码基因sodA、和巯基过氧化物酶编码基因tpx,在SS9-P10背景的srt R缺失菌株中转录下调,而在互补菌株中部分或完全恢复至SS9-P10表达水平,说明它们可能受SrtR调节。转录调节因子编码基因srtR在传代过程中突变导致功能恢复,使传代菌株对H2O2和高温的耐受能力增强,进而导致传代菌株对小鼠的致病力增强。SrtR感受氧化压力不依赖于巯基,在氧化应激情况下Srt R直接或间接调控铁结合蛋白编码基因dpr、超氧化物歧化酶编码基因sodA、和巯基过氧化酶编码基因tpx以应对氧化应激。但是,SrtR感受氧化应激压力和直接调控哪些基因参与抗氧化和高温应激及对小鼠的致病,需要进一步研究。SrtR是XRE家族首个被证实与细菌抗应激应答相关的转录调节因子。SrtR同源蛋白也在其他病原菌如Enterococcus faecium和Clostridium difficile中存在,可能在这些菌中SrtR具有相似的功能。