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禽流感是一种由A型禽流感病毒引起的禽类烈性传染病,其病原属于正黏病毒科、流感病毒属。H9N2亚型禽流感病毒为低致病性禽流感病毒,不仅在全世界范围的禽类中广泛流行,而且可以感染人。在鸭群中H9亚型禽流感病毒很少引起发病,但水禽尤其鸭是流感病毒的贮存库,对禽流感病毒的发生及传播起到了非常重要的作用。因此,对H9N2亚型禽流感病毒的生物学特性研究,不仅在病毒学、兽医学上有重要的学术意义,同时也具有十分重要的公共卫生学意义。2007年,福建省某蛋鸭场饲养的一批万羽麻鸭部分发病,出现产蛋数量下降、软壳蛋、薄壳蛋、畸形蛋数量增加的现象,我们对此发病鸭群进行采样、分离并鉴定为H9N2亚型禽流感病毒,暂命名为A/Duck /Fujian/FQ107/2007（H9N2）（简称Dk/FQ107/07）。本试验对Dk /FQ107/07分离株的致病性、抗原性差异以及分子遗传规律等方面进行研究,以了解并掌握鸭源H9N2亚型禽流感的生物学特性和遗传进化规律,对鸭源H9N2亚型禽流感疫情的防制提供理论和试验依据。通过测定Dk/FQ107/07分离株的EID50、MDT和IVPI,结果分别为10-4.32/0.1 mL、129.6 h和0.04,符合低致病性禽流感病毒的特性。用含毒量均为105.02EID50、104.8EID50和10/(4.02EID50新鲜感染尿囊液分别攻毒26 d的雏鸡、4 d的樱桃谷鸭和15 d的BALB/c小鼠,攻毒感染后21 d内观察雏鸡、樱桃谷鸭和BALB/c小鼠,均无死亡情况,精神状态良好,食欲正常,无明显的发病症状。但攻毒感染后7 d、14 d、21 d对雏鸡和樱桃谷鸭采血取血清进行HI试验,结果表明Dk/FQ107/07分离株对雏鸡具有较好的免疫原性,而对樱桃谷鸭的免疫原性效果较差。攻毒感染后3 d、5 d、7 d、9 d,采取攻毒组BALB/c小鼠的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、脑组织器官,运用RT-PCR方法进行鉴定,结果表明,仅在攻毒感染后第3 d和第5 d BALB/c小鼠的肺脏中检测到病毒的复制。但攻毒感染后7 d、14 d、21 d对其进行HI试验,结果显示在攻毒感染后7 d产生抗体,在14 d和21 d时趋于稳定。运用交叉血凝抑制方法测定Dk/FQ107/07分离株与我国大陆早期H9N2亚型禽流感病毒分离株（A/Chicken/Guandong/FS/94（H9N2）和A/Chicken/Beijing/1/94（H9N2））的抗原性差异,结果表明,Dk/FQ107/07分离株与我国大陆早期H9N2亚型禽流感病毒分离株的抗原性差异不明显,抗原变异较小。运用RT-PCR方法对Dk/FQ107/07分离株基因组进行扩增,克隆测序。结果显示,所扩增的Dk/FQ107/07分离株的HA基因片段长为1 721 nt,有完整的ORF编码560 aa;氨基酸序列分析表明有7个潜在糖基化位点,在HA1分子上有5个潜在糖基化位点分别为第29位、第83位、第219位、第299位和第306位aa,在HA2分子上有2个潜在糖基化位点分别为第493位、第552位aa;第226位aa为谷氨酰胺（Gln）,仅结合唾液酸-a-2,3-半乳糖苷（SAα-2,3Gal）受体位点,符合禽源流感病毒特征;其蛋白裂解位点位于332-340位aa之间,氨基酸组成为-PARSSR↓GLF-,符合低致病性禽流感病毒特征;HA基因核苷酸与A/Chicken/Shantou/5269/2005（H9N2）同源性最高,为98.9%,和我国首次哺乳动物流感病毒分离株A/Swine/HongKong/9/98（H9N2）有较近的遗传进化关系,三者均属于经典的H9N2/Y280群系。所扩增的NA基因片段长为1 428 nt,其ORF编码466 aa;有5个潜在糖基化位点分别为第10位、第81位、第160位、第271位和第323位aa;和中国大陆首次分离株A/Chicken/Beijing/1/94（H9N2）的NA基因比,其蛋白在63、64、65位点上缺失3 aa（T、E、I）,这也是导致第61位糖基化位点缺失的原因;NA基因核苷酸与A/Chicken/Shandong/7/96（H9N2）毒株的同源性最高,为99.5%;从遗传进化关系上与HA基因类似,属于经典的H9N2/Y280群系。所扩增的NP基因片段长度分别为1 565 nt,其ORF编码498 aa;其核苷酸同源性与A/Chicken/Guangxi/55/2005（H9N2）毒株最高,为98.5%;与高致病性鸭源禽流感分离株A/Duck/Fujian/1734/05（H5N1）和A/Duck/Fujian/9713/2005（H5N1）在同一遗传进化分支上。所扩增的M基因片段长度为1 027 nt,其ORF编码348 aa,有完整的M1和M2蛋白。所扩增的NS基因全长为890 nt,其ORF编码337 aa,编码有完整的NS1和NS2蛋白。M和NS基因均和同年山东分离株A/Chicken/Shandong/7/96（H9N2）的同源性最高,分别为99.3%和99.2%,从遗传进化关系上分析均属于经典的H9N2/Y280群系。所扩增的聚合酶基因中,PB2基因片段长度为2 341 nt,其ORF编码759 aa,与其核苷酸同源性最高的毒株为A/Duck/Nanjing/2/97（H9N2）,同源率达95.7%;PB1基因片段长度为2 341 nt,其ORF编码757 aa,与其核苷酸同源性最高的毒株为A/Chicken/Guangdong/47/01（H9N2）同源率达98.6%,从遗传进化关系上分析均属于经典的H9N2/Y280群系。所扩增的聚合酶PA基因片段长度为2 233 nt,其ORF编码716 aa;与其核苷酸同源性最高的毒株为A/Chicken/China/Guangxi17/2000（H9N2）,同源率为96.1%;与高致病性鸭源禽流感分离株A/Duck/Fujian/1734/05（H5N1）和A/Duck/Fujian/9713/2005（H5N1）在同一遗传进化分支上,从PA基因遗传进化分析发现其基因属于H9N2/Y439群系而非经典的H9N2/Y280群系。据Guan等[11]报道,A/Quail/HongKong/G1/97（H9N2）毒株与97年香港发生禽流感病毒直接感染人并导致人死亡事件的H5亚型分离株核苷酸具有很高的同源性,是其内部基因的供体。本试验比较了Dk/FQ107/07分离株与A/Quail/HongKong/G1/97（H9N2）毒株之间的同源性,发现只有M基因的同源率较高,为96%,而其它基因的同源率相对较低,为23.9%-94%,说明Dk/FQ107/07分离株与A/Quail/HongKong/G1/97（H9N2）毒株之间的亲缘关系较远。由此可见,Dk/FQ107/07分离株可能是由不同禽流感病毒基因亚群间发生自然重排的产物,是低毒力H9N2亚型禽流感病毒株。