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本文在显微和超微形态学研究的基础上,结合使用rDNA—ITS区酶切分析和序列测定、自设引物扩增SSU区并进行序列测定研究,以及基因组DNA的AFLP银染技术,对来自我国12个省(市、自治区)的28个茎线虫种群进行了形态鉴定和遗传多样性的研究。研究主要结果如下:
1.应用光学显微镜和扫描电镜,对28个茎线虫种群进行了系统的形态鉴定和描述,将这些种群鉴定为腐烂茎线虫。丰富了腐烂茎线虫的形态学特征,为腐烂茎线虫的形态鉴定提供了新的依据;明确了腐烂茎线虫种内在形态上无间断,即不能根据形态特征对腐烂茎线虫进行种下亚种分类。
2.应用rDNA-ITS-RFLP和rDNA-ITS序列分析,获得腐烂茎线虫28个种群的完整ITS序列和4种酶(AluⅠ、PstⅠ、HinfⅠ和HaeⅢ)的酶切图谱,并根据序列和酶切图谱所表现出的多态性及相似性,将28个腐烂茎线虫种群分为3种类型:ITS-L型(SD2山东甘薯种群)、ITS-M型(GS1甘肃黄芪种群)和ITS-S型(其它26个种群),与美国报道的马铃薯上腐烂茎线虫(GenBank号:AY9870007)序列相比, ITS-L型的相似性达100%,ITS-M型的相似性为97.2%,但是在ITS1区发生了严重的碱基替代和缺失现象,ITS-S型的ITS1区则缺失了188bp。
3.自设引物18SDF1和18SDR2首次扩增我国腐烂茎线虫的18S基因序列,获得了28个种群近全长的18S基因序列,该基因序列较好地揭示了供试种群间的多样性变异,得到了与ITS区研究一致的结果,即可以将供试的28个腐烂茎线虫种群分为相同的3个类型。
4.首次应用基因组DNA-AFLP银染技术,对腐烂茎线虫种群进行了遗传多样性研究,较好地揭示了供试28个种群间的多样性变异,其结果与rDNA-ITS-RFLP、rDNA-ITS序列测定分析以及18S基因序列测定分析结果一致,即将供试的28个腐烂茎线虫种群分为相同的3个类型,而且可以显示ITS-S型的26个种群具有多样性,体现出其研究遗传多样性的优势。
5.首次在黄芪、山药和红掌上发现腐烂茎线虫,并发现该线虫在黄芪和山药上危害造成龟裂和腐烂症状,黄芪上的腐烂茎线虫在遗传学上与其它供试种群以及文献报道的种群存在明显差异。
综上所述,明确了目前在中国主要甘薯种植区发生,并导致甘薯腐烂的茎线虫均为腐烂茎线虫,在中国存在腐烂茎线虫的新寄主植物;揭示了腐烂茎线虫中国种群在形态上有着更丰富的多样性;根据DNA多态性可将中国腐烂茎线虫分为3种类型:ITS-L型、ITS-M型和ITS-S型,同时表明rDNA-ITS和18S序列分析以及基因组DNA的AFLP银染技术能很好的揭示植物线虫遗传多样性。为腐烂茎线虫种群遗传多样性研究,为建立准确、灵敏、快速的腐烂茎线虫检测鉴定方法,为抗腐烂茎线虫甘薯品种的研究奠定了基础。