论文部分内容阅读
背景:自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是与机体自身免疫相关的,病因和发病机制尚未研究清楚的肝脏疾病。研究认为,自身免疫性肝炎肝损伤主要机制涉及两个方面:T细胞介导的细胞毒性作用和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用。但以哪种研究机制为主,尚未定论。而细胞因子的变化贯穿整个损伤机制。近年来,大量研究发现,肝细胞表面的去唾液酸蛋白受体(Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与自身免疫性肝炎发病有很大关联。Hep G2细胞的去唾液酸蛋白受体在IL-1、IL-6等不同细胞因子的刺激下合成的数量和配体结合活性会发生变化。目前,关于自身免疫性肝炎相关白介素IL-2、IL-12、TNF-α对去唾液酸蛋白受体合成的影响报道较少。去唾液酸蛋白受体在自身免疫性肝炎相关白介素的影响下,对其合成的影响分析,无疑能提高去唾液酸蛋白受体对自身免疫性肝炎肝损伤机制的认识。目的:研究自身免疫性肝炎相关白介素IL-2、TNF-α、IL-12对Hep G2细胞合成ASGPR的影响,从而为自身免疫性肝炎的肝损伤机制提供新线索。方法:1.采用RT-PCR方法检测Hep G2细胞在TNF-a、IL-2和IL-12刺激2h、20h、24h后的ASGPR1m RNA和ASGPR2 m RNA表达量变化。2.Western Blot检测Hep G2细胞在TNF-α、IL-2、IL-12刺激后2h、20h、24h后合成表面ASGPR蛋白变化。3.免疫组织化学法检测AIH患者肝细胞表面ASGPR表达情况。结果:1.TNF-α可同步作用于ASGPR1m RNA和ASGPR2 m RNA,2h与20h表达量不同,差异有统计学意义(P1=0.002,P2=0.000);IL-2不能同步作用ASGPR1m RNA和ASGPR2 m RNA,ASGPR1m RNA呈先下降后上升趋势,20h与24h表达量差异有统计学意义(P=0.046),ASGPR2 m RNA呈先上升后下降趋势,2h与20h、2h与24h表达量差异均有统计学意义(P=0.001、P=0.000);IL-12不能同步作用ASGPR1m RNA和ASGPR2 m RNA,ASGPR1m RNA呈先下降趋势,2h与24h表达量差异有统计学意义(P=0.042),ASGPR2 m RNA呈先上升后下降趋势,表达量无差异(χ2=3.289,P=0.193)。2.Hep G2细胞表面ASGPR蛋白表达量:在TNF-α刺激下。24h内呈现上升趋势(P>0.05);在IL-2刺激下,24h内呈现下降趋势(P<0.05);在IL-12刺激下,呈先上升后下降趋势(P<0.05)。3.AIH患者肝细胞ASGPR表达减少,胆小管表面出现表达。结论:1.细胞因子TNF-α、IL-2、IL-12可直接影响ASGPR合成。肝细胞表面ASGPRS数量的变化可能参与到AIH肝损伤机制。2.TNF-α在24h内基本可同步作用于ASGPR1m RNA和ASGPR2 m RNA,IL-12、IL-2则不能同步作用于ASGPR1m RNA和ASGPR2 m RNA。