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R16是以氨萘菲特(amonafide)为母核，对其5’-NH2位点进行杂环取代后获得的萘酰亚胺类新衍生物。抗肿瘤药效学研究表明，R16对不同组织来源的肿瘤细胞株均表现出明显的生长抑制活性和抗多药耐药性质；体内药效评价同样呈现出良好的抑瘤能力。对其抗肿瘤靶点的研究表明，R16为拓扑异构酶II毒剂，通过诱导肿瘤细胞DNA双链断裂、引起细胞阻滞于G2/M期、并导致细胞凋亡。对细胞周期阻滞机理的进一步研究发现，R16主要通过激活ATM-Chk2途径、引起周期素B1(cyclinB1)胞内定位改变、导致G2/M期阻滞；对ATR-Chk1途径较少依赖。在此过程中，观察到R16减少胞内Chk1蛋白的现象；本论文进一步确证该现象，研究其机制并揭示其促肿瘤细胞死亡的作用。
采用WesternBlot法研究发现，正常培养的人结肠癌HCT116细胞表达恒定水平的Chk1蛋白；R16处理该细胞导致其Chk1蛋白呈现时间和浓度依赖性的减少，并表现出典型的浓度效应关系。进一步采用人宫颈癌HeLa细胞、横纹肌肉瘤Rh30细胞及肺癌A549细胞3种不同组织来源的肿瘤细胞株证实了R16减少Chk1蛋白的作用，表明该作用具有普遍性。而R16处理细胞48h对细胞周期检查点蛋白Chk2蛋白水平也无明显影响。
为研究R16减少Chk1蛋白的机制，我们用半定量反转录PCR和RealtimePCR两种方法对HCT116细胞内Chk1的mRNA水平进行检测。结果显示，R16处理HCT116细胞达24h，Chk1的mRNA水平未见明显变化，表明R16不是通过影响Chk1基因转录、从而引起其蛋白水平的减少的。
我们进一步采用两种特异性蛋白酶体抑制剂MG132和乳胞素分别与R16共处理HCT116细胞24h。结果显示，两种抑制剂本身并不改变Chk1的蛋白水平，但却能防止R16引起的Chk1蛋白减少。由于蛋白酶体依赖的降解与靶蛋白的泛素化密切相关，我们用MG132和R16共处理细胞后，用Chk1的抗体将细胞裂解液中的Chk1蛋白免疫沉淀，然后用泛素化抗体进行检测，发现在被蛋白酶体降解之前R16能够促进Chk1的泛素化。
Chk1S317和S345位点的磷酸化对Chk1在DNA损伤应答过程中的活化和功能的发挥是必需的。因此，为进一步明确R16引起的Chk1蛋白减少是否能够促进肿瘤细胞死亡，我们采用野生型HA-Chk1质粒建立S317和S345突变位点。分别将空载体、野生型以及突变的质粒转入HCT116细胞，然后用R16处理细胞48h，再用流式细胞术和台盼蓝染色法分别检测细胞周期亚G1期(Sub-G1)细胞分布比例和台盼蓝阳性细胞比例。结果显示，转入空载体和突变型质粒的肿瘤细胞，经R16处理后，至少有20％分布于亚G1期，而转入野生型质粒却能大大减少这一比例，说明持续表达的Chk1能够减少R16诱导的细胞死亡。该结果被台盼蓝染色法进一步证实。我们的Chk1补偿实验有力地证明，R16诱导的Chk1降解能增强R16诱导的肿瘤细胞凋亡和细胞杀伤作用。以上研究结果表明，R16能够促进泛素-蛋白酶体介导的检查点蛋白Chk1的降解；这一降解作用可促进肿瘤细胞死亡，与R16的抗肿瘤作用密切相关。