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研究背景及目的恶性黑色素瘤约占全身恶性肿瘤的1%。迄今为止,黑色素瘤是一种最难以成功治疗的癌症,因为它在原发病灶的极早期即开始转移。几乎所有的晚期黑色素瘤患者都死于早期诊断后6-10个月之内的远处转移,而且常规黑色素瘤治疗的主要障碍是缺乏肿瘤的特异性。因此,有必要探索更为有效的专门针对肿瘤组织的治疗措施。本研究利用脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)对肿瘤组织特有的趋向性及TNF相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)对肿瘤组织的杀伤作用,通过体外合成mRNA及mRNA转染技术,将TRAIL-ADSCs与恶性黑色素瘤细胞A375相互作用,并进一步采用ELISA、Transwell、Western blot等实验检测TRAIL-ADSCs对恶性黑色素瘤细胞A375活性的影响,探讨其相关的作用机制。本研究内容分为三个部分：1. ADSCs的分离培养及鉴定；2. TRAIL mRNA的合成与质量检测；3. TRAIL-ADSCs对黑色素瘤细胞体外抑瘤作用及机制研究。研究方法与结果1.从脂肪组织中成功分离出ADSCs,该ADSCs具有正常MSCs的表型及特征。SA-β-gal检测连续传代对ADSCs老化的影响,发现本实验分离得到的ADSCs能在体外连续传代10次以上。这一特性能使ADSCs在体外增殖到细胞治疗所需要的量,因此能加速细胞治疗的发展。2.通过对pcDNA3.3-TOPO质粒进行改造,获得了携带TRAIL ORF序列的质粒。进一步通过TAIL PCR对TRAIL ORF加帽、加尾及碱基修饰,获得体外合成的TRAIL mRNA。将该mRNA转染ADSCs,能在蛋白水平上检测到较强的TRAIL表达。这说明本实验所合成的TRAIL mRNA有较好的稳定性和较强的活性。3.从目的基因质粒pORF-sTRAIL中成功地获取sTRAIL基因片段,将其重组到pcDNA3.3-TOPO载体质粒中后,采用TAIL PCR对sTRAIL进行加帽及加尾修饰。将其转染ADSCs后,ADSCs可表达TRAIL,且对ADSCs的表型及细胞活性无明显影响。将TRAIL-ADSCs与恶性黑色素瘤细胞A375相互作用,发现TRAIL-ADSCs可以诱导黑色素瘤细胞死亡,其作用机制可能为通过激活凋亡信号通路中的caspase-3、caspase-8、caspase-9及caspase-4来发挥作用。研究结论体外合成的TRAIL mRNA具有较好的活性,将其转染ADSCs后,TRAIL-ADSCs能有效地诱导黑色素瘤细胞凋亡。