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本文旨在探讨反相高效液相色谱法测定人血浆中的美他环素浓度的可行性，建立最优化色谱条件，为该药的药代动力学研究提供一个可靠的定量分析方法。实验采用高效液相色谱系统，研究了流动相的不同pH值，流动相中有机相的不同比例，检测了波长等因素对样品分离度和灵敏度的影响。同时，研究了使用不同蛋白沉淀剂沉淀蛋白后对样品分离度和灵敏度的影响。最后直接研究了血浆样品中美他环素的浓度。经过实验分析，我们发现实验筛选出的最优化色谱条件为：VP-ODS2501型色谱柱(4μm，4.6mmid×250mm，SHIMADZU)；SIL-10HT自动进样器；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(体积比为30：70)，用磷酸调节pH=3.1；紫外检测波长244nm；流速为1.0ml/min；进样量20μl：柱温：30℃，内标为土霉素。以6％的高氯酸溶液(V/V)沉淀血浆样品中的蛋白质。该方法测定人血浆中美他环素的浓度，日内CV小于3％，日间CV小于5％，线性范围为0.134μg/ml～5.373μg/ml，最低检测限为0.06μg/ml，回收率为98.7％。因此，可以得出结论，本文建立的人血浆中美他环素浓度的测定方法简单快速、灵敏特异、准确，为美他环素的临床药代动力学研究提供了定量测定方法学。