上皮-间质转化在口腔黏膜下纤维性变中作用研究

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目的:  研究上皮-间质转化( Epithelial-to-mesenchymal transitions,EMT)中相关的主要因子,口腔上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和Slug在口腔黏膜下纤维性变(Oral submucous fibrous,OSF)组织中的作用研究。  方法:  采用实时荧光定量PCR法(Q-PCR)及免疫组织化学DAB染色法检测41例 OSF患者和19例口腔完全正常的黏膜组织切片中E-cadherin和 Slug的表达,分析E-cadherin与Slug的表达在OSF和口腔完全正常的口腔黏膜组织中的异常表达及E-cadherin与Slug的异常表达间的相互作用关系。免疫组化DAB染色法结果应用SPSS19.0统计软件对实验数据进行统计处理,各组数据间率的比较采用χ2检验,两因素相关性分析采用Spearman等级相关,以p<0.05为差异显著性标准;采用荧光定量 PCR法(Q-PCR)结果应用SPSS19.0统计软件对实验数据进行统计处理,使用两样本均数t检验法或 Mann-Whitney U秩和检验,分析 OSF组织与正常组织中 Slug与E-cadherin之间表达水平的差异,以p<0.05为差异显著性标准。  结果:  1. E-cadherin和 Slug蛋白在不同样本中的表达 E-cadherin在 OSF组织样本中的阳性表达率为70.73%(29/41),在正常组织中的阳性表达率为100%(19/19), Slug在 OSF组织样本中的阳性表达率为41.46%(17/41),在正常组织中的阳性表达率为10.53%(2/19),对比后具有统计学差异(p<0.05)。  2.E-cadherin和 Slug在 OSF样本组织中表达的相关性分析运用Spearman等级相关的统计学方法分析 E-cadherin与 Slug两蛋白之间的相互关系,41例OSF组织中,我们分析发现 E-cadherin蛋白水平表达与Slug蛋白的水平表达关系呈明显负相关性,差异具有显著性(r=-0.656,p<0.05)。  3.实时荧光定量PCR扩增曲线及溶解曲线的特异性分析E-cadherin、slug及GAPDH的扩增曲线呈S型扩增,扩增后均已达平台期,溶解曲线峰形图为典型的单一峰形图,均无非特异的其他峰形,说明PCR扩增为特异性的单片段扩增且反应体系稳定,无假阳性产物形成,无非特异性产物,无引物二聚体的形成,本实验结果有效可靠。  4.Slug和E-cadherin在OSF样本组织和口腔完全健康的正常口腔黏膜样本组织的RNA表达分析41例OSF组织中Slug的相对表达量为0.0189±0.00668,正常组织中Slug的相对表达量为0.0116±0.00409,p<0.05,OSF组织中 Slug相对表达量高于正常组织,其差异有明显统计学意义, E-cadherin在OSF组织中的相对表达量为0.0101±0.00356,在正常组织中的表达量为0.0252±0.00889,p<0.05,OSF组织中E-cad相对表达量低于正常组织,有统计学意义。  结论:  1. OSF组中E-cadherin的阳性表达率显著降低,表明E-cadherin可能参与了OSF的发生、恶变过程,还可能是导致其恶变的重要因素之一。  2. Slug在OSF组织中的阳性表达率显著高于在正常组织中的表达,差异具有统计学意义(p<0.05),推测Slug在OSF组织中也可能是导致其发生并恶变的因素之一。  3. OSF组织中E-cadherin和Slug的表达呈负相关,说明Slug可能通过某种机制调节E-cadherin的表达进而调控OSF形成及恶变。  4. E-cadherin和Slug在OSF异常表达可能是其恶变成口腔癌的过程中有着密切联系,而E-cadherin和Slug又是EMT机制中重要生物学指标,更能说明EMT可能参与并促进口腔癌前病变转化为口腔鳞状细胞癌。
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