论文部分内容阅读
杂草是稻田主要有害生物之一,严重威胁水稻产量与品质。使用除草剂是防控杂草的主要方式,但易对作物本身产生药害。赤霉素作为植物中普遍存在的植物激素,对植株生长有促进作用。为解决常用除草剂精异丙甲草胺的药害问题,本文采用水稻作为实验材料,前期预实验筛选出缓解药害的最佳GA3浓度为800mg/L,利用960g/L浓度的精异丙甲草胺、800mg/L浓度的赤霉素分别进行4组不同处理(CK、M2、M3、M4 ),对水稻植株株高、根长、鲜重三个生理指标以及过氧化物酶(Peroxidase, POD)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽s转移酶(Glutathione S-transferase, GST)三个酶的酶活力进行测定,获得表型证据后进一步利用RNA-seq和UPLC、MS/MS联用的方法对水稻幼苗进行转录组和代谢组联合分析,主要结果如下:
1.通过对生理指标的测定发现,与对照组(CK )相比,单独施用精异丙甲草胺(M2)后水稻(Oryza sativa L.)的株高,根长和鲜重分别下降至61.8%,57.7%和79.5%,其中,该组的株高、根长和CK组相比均有显著性差异。加入精异丙甲草胺与GA3共同处理的处理组(M3)株高、根长、鲜重恢复率达到90.1%,70.0%和85.5%,株高、根长同CK组和M2组相比均差异显著。仅使用GA3(M4 )的株高、根长、鲜重指标分别达到CK组的99.6%,70.8%和84.6%。证明添加GA3在一定程度上可以缓解精异丙甲草胺对水稻幼苗的药害,且主要体现在水稻幼苗的根茎部分,但以药害缓解为主要目的而设定的浓度,单独施加时会对根产生抑制作用。
2.对水稻植株内POD、SOD和GST3个酶活指标进行了测定,其中POD活性在CK、M2、M3、M4中分别为40.078、32.975、74.732和76.878(U/mgprot),M2中的该指数比CK低17.7%,M3中的该指数比CK高86.5%。在CK、M2、M3、M4中,SOD的活力分别为10.685、9.386、19.850和19.318(U/mgprot),M2和M3中的该指数分别比CK中低12.2%、88.5%。CK,M2,M3,M4的GST活性分别为46.767、35.577、69.41和54.616(U/mgprot),M2中的GST活力与CK相比降低23.9%,M3中的GST活力与CK相比提高48.4%。POD、SOD、GST酶均与活性氧清除有关,推测精异丙甲草胺会对作物清除活性氧等氧化功能产生抑制,添加GA3可以增强清除活性氧的能力,从而缓解精异丙甲草胺对水稻幼苗的药害。
3.进行不同处理组的代谢组和学转录组分析,以挖掘缓解药害相关代谢物及基因变化。代谢组中主要鉴定出的代谢物类型为生物碱、有机酸,黄酮类,类固醇等。其中,生物碱和有机酸的含量与作物的逆境胁迫有关。转录组学和代谢组学分析的结合显示,CKvsM3组类固醇生物合成通路中,类固醇含量降低,同时,该通路上与氧化还原酶相关的3个基因Os01g0211000、Os01g0211200和Os03g0404800的表达量提高,结合酶活力测定结果,发现M2组中与GST活力相关的4个基因Os01g0692000、Os01g0949750、Os01g0949800、Os10g0528100的表达量降低,推测GA3消除活性氧(Reactive oxygen species, ROS)是减轻精异丙甲草胺对水稻生长的压力的关键。这些结果表明,精异丙甲草胺会对水稻的氧化还原酶类产生抑制,导致水稻幼苗的活性氧清除能力减弱,而添加GA3可以通过促进氧化还原酶类和GST相关基因的表达,提高POD、SOD、GST等酶活力,从而提高水稻内活性氧清除能力,减轻了精异丙甲草胺对水稻幼苗的毒性。
1.通过对生理指标的测定发现,与对照组(CK )相比,单独施用精异丙甲草胺(M2)后水稻(Oryza sativa L.)的株高,根长和鲜重分别下降至61.8%,57.7%和79.5%,其中,该组的株高、根长和CK组相比均有显著性差异。加入精异丙甲草胺与GA3共同处理的处理组(M3)株高、根长、鲜重恢复率达到90.1%,70.0%和85.5%,株高、根长同CK组和M2组相比均差异显著。仅使用GA3(M4 )的株高、根长、鲜重指标分别达到CK组的99.6%,70.8%和84.6%。证明添加GA3在一定程度上可以缓解精异丙甲草胺对水稻幼苗的药害,且主要体现在水稻幼苗的根茎部分,但以药害缓解为主要目的而设定的浓度,单独施加时会对根产生抑制作用。
2.对水稻植株内POD、SOD和GST3个酶活指标进行了测定,其中POD活性在CK、M2、M3、M4中分别为40.078、32.975、74.732和76.878(U/mgprot),M2中的该指数比CK低17.7%,M3中的该指数比CK高86.5%。在CK、M2、M3、M4中,SOD的活力分别为10.685、9.386、19.850和19.318(U/mgprot),M2和M3中的该指数分别比CK中低12.2%、88.5%。CK,M2,M3,M4的GST活性分别为46.767、35.577、69.41和54.616(U/mgprot),M2中的GST活力与CK相比降低23.9%,M3中的GST活力与CK相比提高48.4%。POD、SOD、GST酶均与活性氧清除有关,推测精异丙甲草胺会对作物清除活性氧等氧化功能产生抑制,添加GA3可以增强清除活性氧的能力,从而缓解精异丙甲草胺对水稻幼苗的药害。
3.进行不同处理组的代谢组和学转录组分析,以挖掘缓解药害相关代谢物及基因变化。代谢组中主要鉴定出的代谢物类型为生物碱、有机酸,黄酮类,类固醇等。其中,生物碱和有机酸的含量与作物的逆境胁迫有关。转录组学和代谢组学分析的结合显示,CKvsM3组类固醇生物合成通路中,类固醇含量降低,同时,该通路上与氧化还原酶相关的3个基因Os01g0211000、Os01g0211200和Os03g0404800的表达量提高,结合酶活力测定结果,发现M2组中与GST活力相关的4个基因Os01g0692000、Os01g0949750、Os01g0949800、Os10g0528100的表达量降低,推测GA3消除活性氧(Reactive oxygen species, ROS)是减轻精异丙甲草胺对水稻生长的压力的关键。这些结果表明,精异丙甲草胺会对水稻的氧化还原酶类产生抑制,导致水稻幼苗的活性氧清除能力减弱,而添加GA3可以通过促进氧化还原酶类和GST相关基因的表达,提高POD、SOD、GST等酶活力,从而提高水稻内活性氧清除能力,减轻了精异丙甲草胺对水稻幼苗的毒性。