基于二硫键断裂荧光修饰二茂铁荧光增强识别生物硫醇

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二硫键(-S-S-)作为一种相对稳定的共价键,具有动态可逆的性质,在硫醇的存在下,能被剪断裂解成为巯基物质;二茂铁(Fc)作为具有独特的三明治“夹心”结构的物质,拥有优良的氧化还原和富电子的性质,可以用作荧光猝灭剂,用于PET荧光探针的构建。在生物体内,小分子生物硫醇(GSH、Cys、Hcy)含量异常,与许多疾病的发生密切相关。因此,本文以二硫键作为生物硫醇特异性识别位点,二茂铁作为荧光猝灭剂,设计并合成一系列(Py-Fc、Py-N-Fc、NapH-Fc、TPEPy-Fc)基于PET机理的生物硫醇荧光探针,具体内容如下:1、合成出两个含芘荧光团与二茂铁猝灭剂之间不同距离的探针Py-Fc和Py-N-Fc,通过荧光发射光谱,研究出探针Py-Fc的PET猝灭效果比Py-N-Fc更好,并且两种探针都对GSH、Cys、Hcy有很好的响应,对GSH进行分析发现,探针都在2h孵育完成,在pH=7.011.0的范围内,有明显的荧光增强,它们的检测限分别为5.11×10-7M、8.84×10-7M。2、以4-溴-1,8-萘二甲酸酐为起始原料,合成出绿光发射的探针NapH-Fc。在0.01M pH=7.4 DMSO-PBS(2:8;v/v)缓冲液体系中,通过荧光发射光谱表征,探针NapH-Fc对GSH、Cys、Hcy能进行很好的识别,检测限分别为1.34×10-8M、2.47×10-7M和1.13×10-8M,孵育时间为45min,在PH=7.011.0范围内,荧光增强显著。探针在025μM范围内,细胞毒性较低,细胞存活率为75%。同时,对HeLa细胞内的生物硫醇成像,细胞内的荧光强度随着孵育时间增加而增强,并能对HeLa细胞内的生物硫醇进行准确的成像。3、经Heck反应偶联4-乙烯基吡啶,得到近红外荧光发射的探针TPEPy-Fc。在0.01M pH=7.4 DMSO-PBS(1:199;v/v)缓冲液体系中,通过荧光发射光谱,探针TPEPy-Fc对GSH、Cys、Hcy能进行很好的识别,检测限分别为7.69×10-7M、4.68×10-7M、5.98×10-7M。探针在80min孵育完成,且在pH=6.09.0范围内,荧光增强显著。探针在060μM范围内,细胞毒性很低和生物相容性好,细胞存活率为90%以上。对CT-26细胞激光共聚焦成像,能对CT-26细胞内的生物硫醇进行准确的成像。
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