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随着年龄的增加,维生素A二聚物在视网膜色素上皮细胞中逐渐累积,其介导的视网膜色素上皮细胞(Retinal pigment epithelium,RPE)光氧化损伤会引起年龄相关性视网膜病变。目前,通过膳食补充天然抗氧化剂是抑制RPE细胞光氧化损伤,是预防及延缓年龄相关性视网膜病变的主要手段。葡萄中多酚类化合物已被证明可以显著抑制RPE细胞的光氧化损伤[1]。白皮杉醇(Piceatannol)是其中一种含有二苯乙烯结构的多酚类化合物,具有显著的抗氧化生物活性,但其抑制RPE光氧化损伤的作用及机制尚未阐明。本论文主要研究白皮杉醇抑制RPE细胞光氧化损伤作用及机制,为模仿维生素A二聚物介导的RPE细胞光氧化损伤,本文采用蓝光照射荷载维生素A二聚物A2E(N-亚视-N-视黄基-乙醇胺)的ARPE-19细胞作为RPE细胞光氧化损伤模型,探讨白皮杉醇对RPE细胞的保护作用及机制。主要研究内容及结果包括:1.白皮杉醇对ARPE-19细胞光氧化损伤有显著的抑制作用,ARPE-19细胞经光氧化损伤后,凋亡细胞比例明显增加(p<0.01);经白皮杉醇对ARPE-19细胞进行预处理,光氧化损伤细胞的凋亡水平有下降趋势,当白皮杉醇浓度为1μM时,白皮杉醇对细胞凋亡有显著性抑制作用(p<0.01),与未经白皮杉醇处理的光损伤细胞相比凋亡率下降了52%。2.ARPE-19细胞受到光氧化损伤,细胞内ROS的水平显著提高(p<0.01)。经过白皮杉醇预处理,光氧化损伤细胞内ROS水平与未经白皮杉醇处理的光氧化损伤细胞相比有明显的下降,白皮杉醇的浓度为5μM时,ROS水平与损伤组比较显著性降低(p<0.05)3.白皮杉醇促进ARPE-19细胞中Nrf2核位移,从而显著上调Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(HO-1)及醌氧化还原酶(NQO-1)在蛋白水平和m RNA水平的表达(p<0.05)。在转染Nrf2 si RNA的ARPE-19细胞中,白皮杉醇上调HO-1和NQO-1的表达的作用受到抑制,证明白皮杉醇通过Nrf2上调抗氧化酶HO-1及NQO-1的表达。4.白皮杉醇显著提高ARPE-19细胞中p-AKT的表达(p<0.05),而且PI3K抑制剂LY294002可阻断白皮杉醇上调HO-1、NQO-1的表达,从而阻断白皮杉醇对RPE细胞的保护作用,表明PI3K/AKT参与白皮杉醇对Nrf2抗氧化通路的激活作用。5.白皮杉醇抑制光氧化损伤引发的ARPE-19细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress),显著降低内质网应激凋亡蛋白CHOP的表达(p<0.01);此外,下调ER stress标志性分子ATF6及p-IRE1α的表达水平。在转染Nrf2 si RNA的ARPE-19细胞中,白皮杉醇降低CHOP表达的作用被阻断(p<0.01)。由此证明,白皮杉醇通过激活Nrf2信号通路抑制光氧化损伤引起的ER stress。综上所述,本文首次阐明了白皮杉醇抑制ARPE-19细胞光氧化损伤的作用及机理。白皮杉醇通过激活Nrf2调控HO-1、NQO-1的表达,降低氧化应激水平,并且抑制光氧化损伤引发的ER stress。此外,白皮杉醇通过PI3K/AKT通路参与Nrf2/HO-1及NQO-1对RPE细胞的保护作用。