研究表明牙本质矿化过程中钙离子转运是一种逆浓度梯度的跨细胞主动转运过程；成牙本质细胞通过钙离子ATP酶、钠钙离子交换体、L型钙离子通道、1，4，5-三磷酸肌醇受体等多种机制的协同作用将钙离子转运到牙本质矿化前沿。L型钙离子通道是钙离子从成牙本质细胞外流入到胞浆中的重要途径，α₁亚基是其主要功能亚单位并有α₁C、α₁D、α₁S三种基因型。本研究目的在于明确成牙本质细胞中是否有L型钙离子通道α₁亚基D亚型（CaCh3）表达，研究其在发育小鼠牙胚成牙本质细胞分化各阶段分布情况，并通过反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN）技术研究L型钙离子通道α₁亚基D亚型在牙胚发育矿化中的作用，为深入了解牙本质生物矿化机制、促进牙体硬组织损伤后修复提供理论依据。实验分以下两方面： 一L型钙离子通道α₁亚基D亚型在小鼠牙胚发育中的表达 采用免疫组化技术检测L型钙离子通道α₁亚基D亚型在小鼠牙胚发育各阶段（蕾状期除外）中的表达。结果显示：在小鼠成牙本质细胞浆膜上有L型钙离子通道α₁亚基D亚型分布，分布位置随成牙本质细胞分化阶段不同而变化。L型钙离子通道α₁亚基D亚型在前成牙本质细胞，成熟期成牙本质细胞的胞体和突起上都有表达，成牙本质细胞靠近矿化侧和近牙乳头侧表达明显。成釉细胞中强表达，非矿化细胞牙乳头细胞中弱表达。L型钙离子通道α₁亚基D亚型可能参与了矿化过程中钙离子从牙髓侧向成牙本质细胞的转入过程和矿化侧的转出过程。 二L型钙离子通道α₁亚基D亚型反义核酸对体外培养牙胚发育和矿化影响的研究 采用L型钙离子通道α₁亚基D亚型反义核酸技术特异性抑制其在体外培养牙胚中的表达，观察对牙胚发育和矿化的影响。实验共分为三组：反 第四军医大学顾士论文 一 义核酸组；正义对照组及空白对照组。培养牙胚均取自 18d胎龄 Balb／c ，J’ 鼠上颌第一磨牙。体外培养10d后，分别进行L型钙离子通道11亚基D亚 型免疫组织化学染色、HE和 Von Kossa染色检测。结果显示：培养过程中 三组牙胚均继续发育：同空白对照组和正义对照组牙胚相比，反义核酸组 牙胚明显较小；培养 10d后反义核酸组成牙本质细胞多数呈高柱状，排列 较紊乱；反义阻断效果良好；Voll。SSS染色阴性（对照组和正义组阳性）。多 实验结果显示L型钙离子通道山亚基D亚型在成牙本质细胞分化及牙本质 矿化过程中有重要的作用。