中药知母为百合科(Liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides)的干燥根茎,具有清热泻火、生津润燥之功效,为中药常用的滋阴药之一。临床用于外感热病,高热烦渴,肺热燥咳,骨蒸潮热,内热消渴,肠燥便秘等症状。知母中主要成分为甾体皂苷类成分。利用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱、制备液相等分离手段,从知母的70%乙醇提取物中分离得到了 51个化合物,通过理化性质及波谱解析等方法鉴定了这51个化合物的结构分别为2,4’-dihydroxy-4-methoxybenzophenone(1),2,6,4’-trihydroxy-4-methoxybenzophenone(2),anemarrhena A(3),anemarrhena B(4),trans-hinokiresinol(5),cis-hinokiresinol(6),monomethyl-cis-hinokiresinol(7),broussonin B(8),7-hydroxy-3-(4-methoxybenzyl)-chroman(9),5,7-dihydroxy-3-(4-methoxybenzyl)-chroman-4-one(10),quercetin(11),4’-methoxyl-8-isopentenyl-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-β-D-glucopyranosyl-flavonoid(12),mangiferin(13),7-O-β-D-glucopyranosyl-mangiferin(14),chrysophanol(15),.emodin(16),3,4,6,7-tetramethoxy-9,10-dihydrophenanthren-2-ol(17),N-trans-coumaroyltyramine(18),1,1’-dicyclohexylurea(19),(-)-syringaresinol(20),phenethyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(21),coniferin(22),syringin(23),2’,3’-dihydroxy propylpentadecanoate(24),tianshic acid(25),β-sitosterol(26),sarsasapogenin(27),markogenin(28),2β,3β-dihydroxy-23,24-dinor-5β-cholano-22,16-lactone(29),3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranosyl-23,24-dinor-5β-cholano-22,16-lactone(30),15α-hydroxy-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranosyl-5β-pregn-16(17)-ene-20-one(31),3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranosyl-5β-pregn-16(17)-ene-20-one(32),timosaponin AⅣ(33),timosaponin AⅢ(34),5β-spirostan-25(27)-ene-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranoside(35),(5β,25R)-spirostan-3β,15α-diol-3-O-β-D-glucopyranosyl-(l→2)-β-D-galactopyranoside(36),anemarrhensaponin Ⅲ(37),timosaponin G(38),marcogenin-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranoside(39),anemarrhenasaponin Ⅰ(40),anemarrhenasaponin Ia(41),(25S)-26-O-β-D-glucopyranosyl-5β-furostan-3 β,22α,26-triol(42),(25S)-26-O-β-D-glucopyranosyl-5α-furostan-3β,22α,26-triol(43),(25S)-26-O-β-D-glucopyranosyl-5(6)-ene-furostan-3β,22α,26-triol(44),(25S)-26-O-β-D-glucopyranosyl-5β-20(22)-ene-furostan-3β,26-diol(45),anemarnoside B(46),timosaponin J(47),timosaponin BⅠ(48),timosaponin BⅡ(49),timosaponin BⅢ(50),anemarsaponin C(51)。其中化合物3、4、29、30、31、36、43为新化合物。本文测试了部分化合物的胆碱酯酶抑制活性、抗肿瘤活性和抗血小板聚集活性。其中化合物8有较好的丁酰胆碱酯酶抑制活性,浓度为0.1 mg/mL时,对丁酰胆碱酯酶抑制率为75.8%。化合物33、34、35有较好的抗肿瘤活性,对A549,HepG2,Hep3B,Bcap37的抗肿瘤活性甚至要好于阳性药5-氟尿嘧啶。化合物9有较好的抗血小板聚集活性,其活性强于阳性药阿司匹林。阿尔茨海默病是以进行性痴呆为特征的退行性变性疾病。本课题前期研究表明知母中的成分具有显著的抗阿尔茨海默病活性,为了进一步揭示其发挥药效的物质基础,本文以胆碱酯酶为靶点进行活性成分筛选,并应用高分辨液质联用技术对活性成分进行了鉴定。采用冷浸法、加热回流法、超声提取法分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、95%乙醇-水、70%乙醇-水、50%乙醇-水、30%乙醇-水、水等溶剂对干燥的知母根茎粉末进行提取,得到30份提取物。活性筛选结果表明部分提取物有一定的丁酰胆碱酯酶抑制活性,而没有乙酰胆碱酯酶抑制活性。采用二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮提取后活性较好。乙酸乙酯超声提取得到的提取物活性最强,丁酰胆碱酯酶抑制率达到44.1%。将乙酸乙酯超声提取得到的提取物利用D101大孔吸附树脂进行分离,分别得到水洗脱馏分、20%乙醇-水洗脱馏分、40%乙醇-水洗脱馏分、60%乙醇-水洗脱馏分、80%乙醇-水洗脱馏分及95%乙醇-水洗脱馏分。其中60%乙醇-水洗脱馏分的活性较好,丁酰胆碱酯酶抑制率达到81.3%。将60%乙醇-水馏分进液质分析。通过文献检索、对照品比对及液质数据分析,推测了其中15个主要化合物,全部为甾体皂苷类化合物。知母皂苷AⅢ(Timosaponin AⅢ)是典型的螺甾皂苷类化合物,它具有多种药理作用如抗血小板聚集、扩张血管、改善记忆力和学习、抗肿瘤、降血糖等。为了更好的研究知母皂苷AⅢ在体内作用机制,本文利用HPLC-Q-TOF-MS对其体内外代谢产物进行了研究。体内试验中,检测了大鼠的尿液、粪便、血液和胆汁中的代谢产物;在体外试验中,利用肝微粒体进行孵化测定代谢产物。体内体外试验总共鉴定了 19个代谢产物。其代谢类型主要包括脱糖反应、氧化反应、还原反应和异构化反应。