【摘 要】
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MicroRNA(miRNA)是19~24个碱基的非编码内源性单链小RNA,它广泛存在于病毒、原核和真核生物中。miRNA通过与靶基因mRNA的互补结合导致其mRNA降解或抑制蛋白水平的翻译,从而在转录
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MicroRNA(miRNA)是19~24个碱基的非编码内源性单链小RNA,它广泛存在于病毒、原核和真核生物中。miRNA通过与靶基因mRNA的互补结合导致其mRNA降解或抑制蛋白水平的翻译,从而在转录后水平对靶基因的表达进行负调控。前人的研究表明,miRNA对植物生长发育以及器官形成的各个阶段都发挥重要作用。然而,目前主要是以双子叶植物拟南芥为研究材料,对于有关裸子植物高山松生长发育相关miRNA的研究尚不多见。为了研究高山松miRNA171a基因的功能,本论文以模式植物拟南芥为研究材料,构建了过表达高山松miRNA171a前体的表达载体,并获得转基因纯合体株系。实时荧光定量PCR分析结果显示,高山松miRNA171a在转基因拟南芥中表达量明显升高,而拟南芥中GRAS家族成员SCL6-Ⅱ、SCL6-Ⅲ和SCL6-Ⅳ的表达量显著下调,表明高山松miRNA171a能够在拟南芥中异源表达,并发挥生物学功能,抑制了拟南芥中miRNA171c靶基因转录水平的表达。烟草转化实验进一步表明,高山松miRNA171a能够对拟南芥同源靶基因SCL6-Ⅱ、SCL6-Ⅲ和SCL6-ⅣmRNA进行切割,从而抑制其转录本的转录水平。通过对miRNA171a转基因植株的表型观察和数据分析发现,与野生型相比,转基因植株呈现出株高增加、花期提前结束、主根缩短以及叶绿素积累增加等多效表型性状。针对主根缩短这一表型,我们应用荧光标记染料FM4-64对4-5天的根进行了细胞膜染色,双光子激光扫描显微镜观察结果发现,与野生型相比,转基因株系根尖分生区内吞囊泡的数目减少,推测表明高山松miRNA171a与根的生长发育相关。以上的研究结果为进一步研究高山松miRNA171a在高山松生长发育中的作用奠定了基础,也为研究高山松生长发育的调控机制提供新的线索。
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