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本论文以高效液相色谱法为主要的研究手段,以传统经典复方泻心汤为主要的研究对象,考察了复方的组成及其体内吸收情况,并研究了其中存在的问题,主要包括三大部分内容。
第一部分包括第二、第三和第四章,以泻心汤的组成和配伍研究为主。
建立了源自泻心汤方的成药一清胶囊、三黄片以及不同配伍泻心汤中三种主要药效成分黄芩苷、大黄酸和小檗碱同时测定的等度高效液相色谱方法。发现被测化合物之间的酸碱沉淀作用是影响回收率测定的重要因素。详细考察了黄芩苷与小檗碱之间的沉淀作用,发现实际药液中黄芩苷一小檗碱和大黄酸一小檗碱两种沉淀的Ksp值均远超理论计算值。通过测定不同浓度药液的表面张力证明药液具有表面活性,推测其增溶作用引起了Ksp值的显著增大。考察了泻心汤不同配伍条件下主要药效成分的含量变化,发现黄芩与黄连之间对溶出不存在显著的影响,黄连与大黄之间存在很强的抑制溶出作用,黄芩能极大地促进大黄酸的溶出。
第二部分包括第五和第六章,着重的是药物的体内分析。
建立了使用特殊的浸透限制性柱的双柱柱切换的高效液相色谱方法,首次实现了复杂的中药血浆样品中多个化合物的同时检测。此方法具有好的线性、精密度、准确度和高回收率,只需20μL血浆样品直接进样,非常适合自动化操作。运用此方法对三个指标成分的药代动力学进行了研究,其血药浓度最高点均出现在给药后半小时内。详细讨论了小檗碱在后期实验中血药含量低于检测限的原因,推测小檗碱在体内大部分以代谢产物形式排泄。
按照血清药物化学的研究思路,建立了血清样品梯度洗脱的分离方法。发现6组入血成分稳定存在,其中4个为体外成分直接吸收入血,2个为新产生的代谢产物,确定了其中两个含量较高的化合物分别是大黄酸和大黄酚-8-葡萄糖苷。
第三部分为第七章,考察了冲洗再生对柱性质的影响。
以十根在实验室长期用于日常分析的反相C18色谱柱为研究对象,按照文献推荐的方法进行系统冲洗,并加上0.05 mol/L EDTA溶液用于螯合金属离子。色谱性质被划分为四个主要方面并用参数表示:憎水性KET、分子形状选择性αT/O、硅醇基活性KBU、KAM、CEC和金属活性MF。通过再生后的旧柱与新柱色谱性质的比较,证实系统冲洗结合EDTA溶液冲洗能使柱子的各方面性质得到较大程度的恢复。