由青枯菌侵染导致的青枯病是植物的一个重要的细菌性病害。青枯菌三型分泌系统效应蛋白是其致病的重要因子。青枯菌的三型分泌系统效应蛋白众多,但是关于其致病的分子机制目前还了解的比较少。为了进一步快速切入青枯菌效应蛋白的毒力功能研究,本实验选用了瞬时表达体系对青枯菌的效应蛋白在烟草上进行了细胞死亡的筛选,并初步鉴定其介导的植物免疫途径,同时筛选了其中能够干扰植物ETI及PTI免疫途径的效应蛋白。本研究将为青枯菌效应蛋白的毒力功能的深入探索奠定前期基础,为进一步发掘抗青枯菌基因做好铺垫。结果如下:1.利用青枯菌UW551对本氏烟、3种栽培种烟草(N.tabacum D101、N.tabacum云烟87、N.tabacum K326)、及4种野生型烟草(N.langsdorffii、N.repanda、N.alata、N.goodspeedii)进行根部及叶片接种,结果表明,青枯菌UW551无法导致以上几种烟草发病萎蔫,但能够致使叶片出现细胞死亡。UW551的T3SS突变体△hrpB在烟草叶片上并无细胞死亡反应。说明UW551产生的细胞死亡现象是由T3SS介导的。2.从青枯菌UW551中克隆了47个效应子,并利用马铃薯病毒双元表达载体pGR106成功构建了其中42个效应子基因的瞬时表达载体。3.利用农杆菌介导的瞬时表达系统在本氏烟及7种烟草上对这些效应子进行鉴定发现,效应子Rip5可在所有的测试植物上诱导叶片组织的细胞死亡;Rip6可在本氏烟及4种野生型烟草上诱导叶片组织的细胞死亡;另外,Rip25、Rip26、Rip32、Rip 40、Rip 55、Rip 56、Hyp9可引起本氏烟叶片组织的不同程度的细胞死亡。4.对Rip5、Rip6、Rip25、Rip26、Rip55、Rip56在本氏烟上的免疫途径中的功能研究,分别沉默植物免疫途径的关键基因NbBAK1、NbNDR1、NbEDS1、NbSGT1、NbWIPK、NbCoi1,发现Rip26在NbBAK1沉默植株中诱导的细胞死亡增强,而在NbNDR1的沉默植株中则明显减弱。5.在UW551的效应子对本氏烟叶片ETI与PTI介导细胞死亡的抑制分析中发现,有7个能够完全抑制INF1激发的HR,分别是Rip6、Rip10、Rip13、Rip28、Rip30、Rip32、Rip47、Hyp11;有9个能够抑制PiCRN2激发的HR,分别是Rip6、Rip10、Rip13、Rip30、Rip31、Rip32、Rip36、Rip53、Hyp11;Rip6能够部分抑制Avr3a/R3a、Avr4/Cf4激发的HR。青枯菌UW551的部分效应子对PCD具有相同的抑制作用,其在病原菌侵染中可能抑制PTI、ETI的免疫反应。