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目的：探讨DNMT3B与肝癌发生发展的关系,为肝癌的早期诊断和临床治疗提供实验基础。
方法：用免疫组织化学技术(ABC法)分析DNMT3B在肝癌病例组织石蜡切片中的表达。用脂质体将构建好的DNMT3B siRNA重组质粒载体及其对照质粒载体分别转染到肝癌癌旁细胞系QSG-7701中,通过G418筛选获得稳定转染的细胞系,并用Real-timeFluorescent Quantitative RT-PCR及Western Blotting方法检测DNMT3B沉默效率。通过CellCounting Kit-8检测DNMT3B表达抑制后肝癌细胞系及癌旁细胞系增殖能力的变化。用流式细胞仪技术分析DNMT3B表达抑制后的肝癌癌旁细胞系的细胞周期的改变情况。用Hoechst33342检测DNMT3B表达抑制后的肝癌细胞系及癌旁细胞系的细胞凋亡变化。通过软琼脂克隆形成实验检测DNMT3B表达抑制后的肝癌细胞系及癌旁细胞系细胞克隆形成率的变化。
结果：免疫组织化学结果显示,在75例江苏启东地区肝癌患者的病理组织石蜡切片中有45例(60％)样本表现为DNMT3B在癌巢中的表达水平明显低于其在癌旁组织的表达。DNMT3BsiRNA.重组载体有效地抑制了肝癌癌旁细胞系QSG-7701中DNMT3B的表达。细胞增殖实验结果显示转染了DNMT3B siRNA重组载体的肝癌细胞系SMMC-7721及癌旁细胞系QSG-7701的细胞增殖能力低于转染了对照质粒载体的细胞系。细胞周期检测结果显示,细胞系QSG-7701-pMT3B中G1期细胞比例增加,G2期、S期细胞减少,QSG-7701-pMT3B及对照细胞系QSG-7701-sMT3B的增殖指数分别为0.30a±0.03和0.36±0.04(P<0.01)。凋亡检测结果显示,与其对照细胞系相比,QSG-7701-pMT3B的细胞凋亡率增高,且在48hr时的细胞凋亡率有显著差异(P<0.05);与其对照细胞系相比,SMMC-7721-pMT3B的细胞凋亡率增高,且在72hr时两者的细胞凋亡率有显著差异(P<0.05)。软琼脂克隆形成实验结果显示,与其对照细胞系相比, QSG-7701-pMT3B的细胞克隆形成率降低,两者的细胞克隆形成率有显著差异(P<0.01);与其对照细胞系相比, SMMC-7721-pMT3B的细胞克隆形成率降低,两者的细胞克隆形成率有显著差异(P<0.01)。
结论：1)DNMT3B在肝癌病例组织中存在癌旁表达水平高于癌巢表达水平的异常表达模式；2)DNMT3B的异常表达可能与乙肝病毒有关；3)DNMT3B的表达下调抑制了肝癌癌旁系和肝癌细胞系细胞的增殖能力；4)DNMT3B的表达抑制影响了细胞周期并诱导了细胞凋亡；5)DNMT3B与肝癌的发生、发展可能具有一定的相关性。