平菇(Pleurotus ostreatus)是我国栽培的主要食用菌之一,其子实体是食用的主要部分,但是目前关于其子实体发育过程的信息十分有限,特别是缺少子实体发育相关的功能基因,因此无法精确的描述子实体发育的机制。报道显示,裂褶菌基因fst3能被来自子实体发育的信号激活,这将阻止周围气生菌丝的生长,为子实体的形成争夺更多的营养,但目前尚没有发现有关平菇fst3基因的研究和报道。本研究将裂褶菌fst3基因与平菇基因组在JGI上进行比对,根据得到的同源序列设计引物,通过RT-PCR方法,结合RACE技术克隆出平菇fst3基因的全长。对目的基因进行了初步的生物信息学分析和转录水平的表达模式分析;用pEASY-E2原核表达系统进行该基因的原核表达;构建了平菇fst3过量表达载体和反义表达载体,以期通过农杆菌技术介导转化平菇来进一步揭示平菇子实体发育过程中的分子机制。研究的主要结论如下:1.提取平菇菌丝总RNA,采用RACE技术首次克隆出平菇fst3基因的全长cDNA,GeneBank登录号为KJ716894。生物信息学分析表明,编码序列长2549bp,翻译795个氨基酸。NCBI保守域分析表明,该基因属于真菌转录因子MHR超家族的基因,经查询该家族基因具有典型的锌指DNA结合域。2.用半定量RT-PCR分析该基因在平菇不同发育阶段表达情况,结果显示,fst3在平菇子实体期表达水平最高,表明fst3基因可能跟平菇的子实体发育相关。用pEASY-E2原核表达系统进行fst3的原核表达,SDS-PAGE分析表明fst3编码蛋白的相对分子量约为88 kDa,与预测分子量一致,表明在原核细胞中能够正常表达,验证了开放阅读框的正确性。3.利用真核双元表达载体p-gpd1300进行fst3的真核表达,利用酶切、酶连等方法成功构建了fst3过量表达载体p-gpd1300-正fst3和反义沉默载体p-gpd1300-反fst3。为进一步农杆菌介导转化平菇新831准备了实验材料。