【摘 要】
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MicroRNA(miRNA)是一类长度为18-23个碱基的内源性、非编码RNA,它与真核细胞的基因调控有着重要的关系。研究表明,miRNA参与了疾病发生发展过程中的信号调节,并且miRNA的异常
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MicroRNA(miRNA)是一类长度为18-23个碱基的内源性、非编码RNA,它与真核细胞的基因调控有着重要的关系。研究表明,miRNA参与了疾病发生发展过程中的信号调节,并且miRNA的异常表达与癌症,神经系统疾病及糖尿病等多种疾病有着紧密的联系。作为一种新型的生物标志物,miRNA具有长度短、丰度低及家族同源性高等特性,使得临床上实现高灵敏检测miRNA面临着巨大的挑战。因此,建立高灵敏的miRNA定量分析方法是目前亟需解决的难题。本课题建立了一种基于T7核酸外切酶“信号关闭”的策略,在均相体系中成功实现了对miRNA的可视化检测。在无靶物质miRNA存在时,单链捕获探针无法被T7核酸外切酶剪切,打开含有G4序列的发夹结构探针,吸光度达到最大值;在靶物质miRNA存在时,miRNA与捕获探针杂交形成DNA/RNA双链,利用T7核酸外切酶,剪切双链中的捕获探针,使得捕获探针浓度大大减小,被打开的发夹探针数量减少,从而导致信号降低。在最优的实验条件下,miRNA最低检测限可达到0.6 p M(S/N=3),在10 p M到100 n M的线性范围内,吸光度的与miRNA的浓度呈线性关系。该方法对同源miRNA具有很高的区分度,同时在复杂基质中对miRNA有着良好的分析性能。因此,该传感策略将有可能为miRNA的检测提供了新方法,为临床相关疾病的诊断及治疗提供了技术支持。
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