本研究的目的是系统地研究CTS在大鼠与Beagle犬体内的吸收、分布、代谢、排泄过程，阐明CTS及其代谢物体内药动学特征，为药物的药效、毒理评价以及临床新药报批提供资料，为其它丹参酮类化合物的药代动力学研究提供参考和新思路。 本研究的主要内容包括以下几个部分： 一、建立检测生物样品中CTS、TS ⅡA及结合型CTS、TS ⅡA的LC/MS/MS分析方法目的建立检测生物样品中CTS、代谢物丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA，TSⅡA)以及结合型CTS、TS ⅡA的方法，用于药动学的分析研究。 结论：本部分建立并确证了检测生物样品中CTS、代谢物TS ⅡA以及结合型CTS、TS ⅡA的灵敏度高、特异性强、快速可靠、线性良好的方法，该分析方法的样品处理及检测过程较已报道的方法简单、快速，可满足CTS药代动力学研究的要求。 二、CTS的血药浓度-时间曲线及吸收目的研究大鼠与Beagle犬灌胃和静脉注射不同剂量CTS后原型与代谢物的药代动力学及生物利用度。 方法：采用高效液相色谱．串联质谱(LC/MS/MS)方法测定血浆中CTS与TS ⅡA的浓度，用非房室模型计算其药代动力学参数，用线性相关、方差分析等方法对药动学参数进行了统计分析。 结果：大鼠口服CTS 30～180 mg/Kg剂量范围CTS的AUC0-τ与AUC0-∞均随给药剂量的增加而增加，分别将AUC与剂量作线性回归，r值为0.99～1.00，各剂量组t1/2等参数经组间方差分析无统计学差异，CTS的消除半衰期为4.2～5.4 h，口服生物利用度为6.7％±2.1％，代谢物TS ⅡA、葡萄糖醛酸结合型CTS(CTSⅡ)、葡萄糖醛酸结合型TS ⅡA(TS ⅡAⅡ)的消除半衰期分别为4.1～5.4 h、4.2～5.5 h及5.9～8.8 h，以摩尔浓度计算大鼠口服30、60、180 mg/Kg CTS后原型药与各代谢物在体内水平之比分别为(AUCCTS：AUCTS：AUCCTS-Ⅱ：AUCTSⅡA-Ⅱ)1.0：0.7：1.4：1.5、1.0：0.2：3.7：2.5与1.0：0.1：3.3：0.8；Beagle犬口服CTS 17.8～160.2mg/kg剂量范围CTS的AUC0-t与AUC0-∞均随给药剂量的增加而增加，分别将AUC与剂量作线性回归r值为0.8～0.84，各剂量组t1/2等参数经组间方差分析无统计学差异，CTS的消除半衰期为6.1～7.8 h，口服生物利用度为11.3％±3.7％，代谢物TS IIA、CTSⅡ、TS IIAⅡ的消除半衰期分别为5.2～5.5 h、7.5～8.3 h及6.2～6.8h，以摩尔浓度计算Beagle犬口服17.8、53.4、160.2 mg/Kg CTS后原型药与各代谢物在体内水平之比分别为(AUCCTS：AUCTS：AUCCTS-Ⅱ：AUCTSⅡA-Ⅱ)1.0：0.3：2.0：2.0、1.0：0.5：0.3：0.2与1.0：0.4：1.0：0.6。Beagle犬多次给药后体内血药浓度未能达稳态，但CTS与Ⅰ相、Ⅱ相代谢物在体内的水平均较单次给药增加。结论通过剂型改造后，CTS的口服生物利用度较以往研究已有很大提高。大鼠口服CTS 30～180 mg/Kg剂量范围CTS在体内的药动学过程符合线性。Beagle犬口服CTS 17.8～160.2 mg/kg范围CTS在体内的药动学过程基本符合线性特征。多次给药或大剂量给药后CTS不会在体内发生累积，但可能会因为生物利用度的增加导致原型与代谢物浓度的增加。 CTS脂溶性高的理化特性并不是造成药物口服后血药浓度低的唯一原因，CTS在组织的广泛分布、广泛的Ⅰ、Ⅱ相代谢以及P-gp糖蛋白对CTS的外排都对口服CTS在体内的血药浓度产生影响，CTS的低口服生物利用度是上述因素综合作用的结果。但尚需组织分布实验、代谢实验进一步证明。 三、CTS在大鼠体内的分布研究目的研究口服和静脉注射给药后CTS与TS ⅡA在大鼠各组织中的分布特点及组织中药物浓度随时间的变化规律。 　　方法：大鼠单次口服或静脉注射给予CTS制剂60 mg/Kg后于0.5、1.5、3.0、20.0、48、72 h处死动物，取各组织器官，制成0.5 g/mL匀浆，取匀浆处理，采用高效液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)方法测定各组织匀浆中CTS与代谢物TS ⅡA的浓度，梯形法计算CTS与TS ⅡA在组织与血中的AUC0-t与Kp值(组织/血浆中药物浓度比，Kp=[AUC0-t(组织)/AUC0-t(血浆)])。 结果：给药后在组织中CTS与TS ⅡA的浓度远远高于血浆浓度。口服给药各组织的CTS与TS ⅡA的Kp值分别为为0.3～254.7与20.5～11143.0；静脉给药各组织的CTS与TS ⅡA的Kp值分别为为0.2～2109.8与20.5～303.3。静脉给药后大部分组织CTS与TS ⅡA组织药物浓度．时间曲线在给药后3 h出现“第二峰”。原型与代谢物浓度在不同给药途径、不同脏器不同：口服给药时以CTS与TS ⅡA在胃、肺、小肠和肝脏最高，静注给药时以肺部、脂肪、心、肝最高，静脉给药后72 h肺中仍能检测到原型。CTS在脑组织中药物浓度较低，但仍可达到一定浓度。 结论：给药后原型与代谢物均能在大鼠体内能迅速、广泛分布，药物在各组织中的分布属灌流限制性，分布的速度与程度受器官灌流速度、药物在该组织的Kp值、药物与组织的亲和力等因素影响。CTS在脑中能达到一定的浓度，为药物的药效实验结果提供药动学支持。口服与静脉给药途径下CTS与TS ⅡA在胃肠分布结果表现出显著差异，提示口服给药后胃肠对药物及代谢物有“吸附”作用。静脉给药后大部分组织CTS与TS ⅡA组织药物浓度．时间曲线出现双峰现象很可能与EHC有关，从另一方面证明了EHC对体内药物水平的影响。关于CTS及代谢物TS ⅡA肺蓄积的原因和机制以及EHC是否是造成静脉给药后组织药物-时间曲线出现双峰的原因需进一步的实验研究。 四、CTS对大鼠肝代谢酶的影响以及在大鼠体内的代谢 　　目的： 　　1.大鼠口服CTS制剂后药物对大鼠肝微粒体CYP酶各亚型的影响。 2.研究CTS在体内的代谢产物与代谢途径。 方法：大鼠连续10日口服20～540 mg/Kg CTS制剂后，处死动物并取肝脏制备肝微粒体，分别用"Cocktail”体外孵育法、Western-blotting以及RT-PCR考察CTS对CYP酶各亚型酶活性、蛋白以及基因表达的变化。 采用LC/MS/MS技术，通过对体外肝微粒体孵育，体外含氨肝微粒体体系孵育，健康大鼠口服CTS制剂后血、组织、胆汁、尿、粪便样品以及高血氨模型大鼠口服CTS后血、组织、尿、粪便样品分析，考察CTS在体内的代谢产物与代谢途径。 结果：大鼠连续10日口服不同剂量CTS：20、60、180以及540 mg/Kg/day剂量组CYPlA2探针代谢物的量分别比阴性对照组提高60％、200％、220％和430％，CYP1A2的蛋白表达分别比阴性对照组提高130％、280％、210％和320％，CYP1A2的基因表达分别比对照组提高10％、30％、130％和150％。 结论：口服CTS后药物能显著诱导大鼠肝微粒体CYP1A2的基因和蛋白表达以及活性，而且呈现剂量依赖性。提示经CYP1A2代谢的药物在临床上与CTS合用时，有可能发生药物相互作用。 CTS在大鼠体内可进行广泛的Ⅰ相代谢与Ⅱ相代谢，与文献报道一致；其中CTS与氨结合代谢产物为首次报道，这与药效学实验显示CTS可以清除体内血/脑氨结果相符，为CTS去除体内氨的作用机理提供药动学依据。 五、CTS在大鼠体内的排泄目的研究CTS及其Ⅰ、Ⅱ相代谢物在大鼠体内的排泄。 方法大鼠单次口服CTS制剂60 mg/Kg后收集尿液、胆汁和粪便样品，采用高效液相色谱．串联质谱(LC/MS/MS)方法测定样品中非结合型与总CTS和TS ⅡA的浓度，计算CTS及其Ⅰ、Ⅱ相代谢物的累积排泄量和累积排泄百分率。 结果口服给药后CTS和分别代谢成TS ⅡA、CTSⅡ、TS ⅡAⅡ的CTS经尿排泄累积百分率为1.2％(×10-3)、16.3％(×10-3)、2.3％(×10-3)、15.8％(×10-3)，经胆汁排泄为0.7％、0.4％、0.9％、0.3％，经粪排泄为8.0％、4.8％、1.4％、0.8％，经尿、粪、胆汁排泄的累积百分率原型药物约为15％。 结论：原型药与代谢物自尿的排泄非常有限，而粪和胆汁是CTS及其代谢物的主要排泄途径。CTS的排泄质量不守衡，推测广泛的组织分布与代谢是造成这种现象的主要原因。 综上所述，本研究在建立了快速、灵敏、可靠的LC/MS/MS分析方法的基础上，对CTS及其Ⅰ、Ⅱ相代谢物在体内的吸收、分布、代谢、排泄过程进行了系统研究，发现了CTS药代动力学的一些新特性与新现象，丰富了CTS药代动力学数据，为药物的药效及毒理评价、制剂研究临床研究提供药动学依据，为其他丹参酮类化合物的药代动力学研究提供参考。