论文部分内容阅读
目的:在细胞水平探讨Ang-(1-7)是否是通过调节内质网应激途径对心肌细胞H/R损伤起保护作用的,以及是否是作用于其特异性受体Mas来发挥此作用的。方法:1.H9C2细胞培养、传代、冻存;建立心肌细胞H/R模型;2.分别给予Ang-(1-7)或(和)A-779干预,即:(1)Control组:无干预;(2)H/R组:先缺氧3小时,再复氧6小时;(3)Ang-(1-7)+H/R组:缺氧复氧前30分钟给予1000n M Ang-(1-7)孵育,后再缺氧3小时,复氧6小时;(4)Ang-(1-7)+A-779+H/R组:缺氧复氧前1小时给予1000n MA-779,缺氧复氧前30分钟给予1000n M Ang-(1-7)孵育,后再缺氧3小时,复氧6小时;(5)A-779+H/R组:缺氧复氧前1小时给予1000n MA-779,后再缺氧3小时,复氧6小时。3.检测心肌细胞凋亡、检测细胞上清液心肌酶、检测心肌细胞内质网应激相关指标,研究Ang-(1-7)对心肌细胞缺血再灌损伤的保护作用及其作用机制。结果:1.上清液CK-MB含量(ng/ml):分别为429.11±260.55、1145.87±58.50、601.94±153.38、1081.88±184.39、1085.65±134.28。与control组相比,H/R组的CK-MB的含量明显增加(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的CK-MB的含量增加(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的CK-MB的含量明显增加(P<0.01),A-779+H/R组的CK-MB的含量明显增加(P<0.01);于H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的CK-MB的含量减少(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的CK-MB的含量差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的CK-MB的含量差异无统计学意义(P>0.05)。2.Caspase-3分光光度法检测细胞凋亡:各组凋亡细胞的相对OD值,分别为2.07±0.18、2.66±0.14、2.13±0.09、2.59±0.29、2.59±0.15。与control组相比,H/R组的相对OD值增加(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的相对OD值增加(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的相对OD值增加(P<0.01),A-779+H/R组的相对OD值增加(P<0.01);于H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的相对OD值减少(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的相对OD值差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的相对OD值差异无统计学意义(P>0.05)3.Western blot检测凋亡相关蛋白3.1 Bcl-2蛋白在各组细胞中的表达分别为(×10-2):6.16±0.74、2.21±0.60、3.59±0.38、2.38±0.72、2.41±0.70,与control组相比,H/R组的表达量明显减少(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的表达量减少(P<0.01),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量减少(P<0.01),A-779+H/R组的表达量减少(P<0.01);与H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的表达量增加(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05);3.2 Bim蛋白在各组细胞中的表达分别为(×10-2):7.47±0.54、13.02±0.85、10.28±0.74、13.85±2.4、12.58±1.96,与control组相比,H/R组的表达量增加(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的表达量增加(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01),A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01);与H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的表达量减少(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05);4.Western blot检测内质网应激相关蛋白4.1 GRP78蛋白在各组细胞中的表达分别为(×10-2):197.57±15.27、258.96±30.29、194.13±18.75、268.89±24.92、268.13±53.00,与control组相比,H/R组的表达量增加(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的表达量差异无统计学意义(P>0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01),A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01);与H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的表达量减少(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05);4.2 CHOP蛋白在各组细胞中的表达分别为(×10-2):23.52±5.68、60.32±11.34、42.57±7.62、63.05±6.65、65.46±4.41,与control组相比,H/R组的表达量增加(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的表达量增加(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01),A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01);与H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的表达量减少(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05);4.3 Caspase12蛋白在各组细胞中的表达分别为(×10-2):46.32±10.12、95.87±13.94、68.71±10.89、84.19±12.24、100.28±14.58,与control组相比,H/R组的表达量增加(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的表达量增加(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01),A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01);与H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的表达量减少(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05);4.4 JNK蛋白在各组细胞中的表达分别为(×10-2):28.02±6.74、72.07±9.36、48.31±10.05、74.03±18.30、68.74±9.26,与control组相比,H/R组的表达量增加(P<0.01),Ang-(1-7)+H/R组的表达量增加(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01),A-779+H/R组的表达量增加(P<0.01);与H/R组相比,Ang-(1-7)+H/R组的表达量减少(P<0.05),Ang-(1-7)+A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05),A-779+H/R组的表达量的差异无统计学意义(P>0.05)。本课题为国家自然科学基金“血管紧张素-(1-7)抑制内质网应激对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究(编号:81570273)”。结论:1.Ang-(1-7)通过抑制内质网应激—凋亡通路对MIRI起保护作用。2.Ang-(1-7)通过其特异性受体Mas受体发挥上述作用。