随着畜牧业的发展，抗菌素在畜牧业生产中的应用不断增加，近20年来，四环素类、氟喹诺酮类、磺胺类药物等在畜牧业中的应用越来越广泛，已成为现代畜牧业不可或缺的物质基础，但是抗菌素不合理应用所产生的残留问题日益成为我国和世界各国所关注的对象。我国自加入WTO以来，抗菌素残留问题严重影响了我国的进出口贸易，给我国的经济利益造成了极大的损失。为了适应残留检测的需要，建立灵敏度、准确度和精密度均符合残留检测要求的抗菌素残留检测方法已成为研究的重点。 本实验采用高效液相色谱仪(HPLC-PDAD、HPLC-FLD)作为检测手段，对牛奶中三类九种抗菌素残留的定性定量分析方法进行了较系统的研究，根据高效液相色谱仪的特点，分别对其前处理及分离条件进行了优化探讨。建立了土霉素、金霉素及磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲嗯唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯啉药物残留的高效液相色谱一光电二极管阵列检测器(HPLC-PDAD)分离分析方法；建立了恩诺沙星、环丙沙星药物残留的高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)分离分析方法，结果满足要求。本实验采用光电二极管阵列检测技术，一次分离分析就可以获得被分离组分的色谱图及其相应的紫外可见吸收光谱图，以保留时间、特征紫外可见吸收光谱等较为丰富和全面的信息对复杂组分进行定性定量研究，尽可能的保证了所研究的分离分析方法的可靠性。本实验介绍了测量不确定度的判定和表述的一般原则，讨论了HPLC方法中影响测量不确定度的因素并进行分析和评定，更加完整地对测量结果质量有一个定量的描述，以便使新建立的分离分析方法更加系统和完善。 本实验完成的兽药残留分析方法研究，对类似药物残留分析方法的建立提出了一些有益的建议，并且具有切合实际的参考价值。