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目的：通过体外分离、培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立血管内皮细胞(VEC)的体外培养模型,为研究VEC提供了可靠的实验手段；检测HUVECs中雌激素受体两个亚型ERa和ERβ的表达差异；并进一步揭示内皮细胞中的ERα、ERβ对动脉粥样硬化形成的初始过程——单核细胞(THP-1)与HUVECs之间粘附的影响。方法：无菌条件下剪取新生儿脐带(约20cm-30cm),采用胶原酶Ⅱ灌流消化法进行原代HUVECs的体外分离、培养,并进行消化传代,将2-4代细胞进行冻存,定期复苏,以保持实验细胞的同源同代性,分别从细胞形态学、Ⅷ因子相关抗原免疫组化及表面抗原CD34的检测进行内皮细胞的鉴定。采用2-4代的HUVECs,通过western blot及RT-PCR从蛋白水平和mRNA水平分别对HUVECs进行雌激素受体(ERα、ERβ)相对表达的检测。用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000向HUVECs转染质粒(pWPI-flag-hERa, pWPI-flag-ERβ, PsuperiorERasiRNA, PsuperiorERβsiRNA, pWPI-vector, pLVTHM-scramble),48小时后,分别与相同数目的THP-1(用绿色荧光染料染色)进行共培养1.5h,共分为六组：ERa+组HUVEC (ERα+)与THP-1, ERα-组HUVEC (ERα-)与THP-1; ERβ+组HUVEC (ERβ+)与THP-1, ERβ-组HUVEC (ERβ-)与THP-1, Ve组HUVEC (Ve)与THP-1, Sc组HUVEC (Sc)与THP-1。荧光显微镜下观察并比较各组两种细胞之间的粘附情况。结果：①倒置显微镜下观察HUVECs的体外生长特点,原代培养的HUVECs 3～5小时开始贴壁,48-72h细胞生长最快,呈对数生长,胞质丰富,胞核清晰可见,5-7d细胞生长融合呈单层“铺路石”样镶嵌排列。传代细胞与原代细胞相比贴壁时间早,生长更旺盛,但细胞形态极为相似。Ⅷ因子相关抗原染色96%以上的内皮细胞呈阳性,表面抗原CD34的阳性率高达89.38%,提示细胞纯度高,且证实分离培养的细胞为HUVECs;②estern blot及RT-PCR的相对定量结果均显示在HUVECs中ERp的表达高于ERa的表达,差异具有统计学意义(t=-15.626,P<0.01；t=-3.995,P<0.05),与以往的研究结果相一致；③比较THP-1与基因转染后HUVECs之间的粘附情况显示：ERa+组两种细胞之间的粘附率较对照组Ve组细胞之间的粘附率明显降低,差异具有统计学意义(t=-47.117,P<0.01); ERα-组单核细胞和内皮细胞之间的粘附率较对照组Sc组明显升高,差异具有统计学意义(t=48.111,P<0.01); ERβ+组与ERβ-组两种细胞之间的粘附率较对照组Ve组及Sc组无明显差异(t=2.64, P>0.05; t=-0.564, P >0.05).结论：①原代HUVECs的体外分离、培养、冻存、复苏及鉴定方法成熟可靠、简便易行,为进行VEC的体外研究提供了理想的实验方法和材料；②目前已知雌激素受体主要存在两种亚型ERa和ERβ,两者在体内分布极其广泛,虽然结构相似,但在不同组织中ERα和ERβ的优势表达不同,发挥的作用也不尽相同,其中本研究结果显示在HUVECs中ERβ的表达高于ERa的表达；③在单核细胞向内皮细胞的迁移、粘附的过程中,HUVECs中ERa过表达后可明显抑制THP-1与HUVECs之间的粘附,而ERβ的作用并不明显,为动脉粥样硬化的早期临床干预治疗提供了新的理论依据及思路。