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目的克隆多疣壁虎snail基因,分析壁虎snail蛋白的基本结构特征;检测壁虎snail在断尾再生脊髓中的表达变化和细胞定位;体外细胞模型研究snail家族成员对星型胶质细胞增殖、迁移的影响,并研究对神经元抗凋亡的影响;研究snail促进星型胶质细胞增殖、迁移,以及对神经元抗凋亡的信号机制。阐明snail促进壁虎脊髓再生的调节机理。方法通过RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术克隆多疣壁虎snail基因cDNA全长;Real-Time PCR、Western blot和组织免疫荧光方法检测断尾脊髓中snail家族的表达变化和细胞定位;构建snail慢病毒,过表达壁虎星形胶质细胞和SH-SY5Y细胞株;EDU实验以及流式细胞周期检测snail过表达对细胞增殖的影响,Transwell及划痕实验检测snail过表达对细胞迁移的影响;Pull-Down实验研究snail过表达对小G家族蛋白的影响;Western blot检测snail过表达对神经元抗凋亡的影响。结果(1)克隆多疣壁虎snail家族基因cDNA全长序列。snail1 cDNA全长1292 bp,编码259个氨基酸;snail2 cDNA全长1959 bp,编码268个氨基酸;snail3 cDNA全长1590 bp,编码300个氨基酸。(2)snail在多疣壁虎各组织中都有表达,在卵巢中表达量最高,在脊髓中表达量也较为丰富;在多疣壁虎断尾脊髓再生过程中,snail1、snail2和snail3表达量均上调。(3)组织免疫荧光结果表明,snail定位于多疣壁虎断尾脊髓的星形胶质细胞和神经元中。(4)snail过表达对星形胶质细胞增殖没有影响,但促进星形胶质细胞的迁移。(5)Pull-Down检测结果发现,snail过表达能增加小G蛋白家族成员cdc-42,Rac1的表达。(6)星形胶质细胞中过表达snail促进EMT相关Marker的升高。(7)TGF-β1能提高星形胶质细胞中snail1和snail2的表达。(8)snail过表达促进SH-SY5Y细胞的存活,western blot检测发现,snail能抑制Cleaved Caspase 3的表达,激活P-Erk,P-Akt和BCL-XL介导的抗凋亡信号通路。结论1.克隆多疣壁虎snail家族基因的cDNA全长;2.snail家族成员具有促进多疣壁虎断尾脊髓再生作用;3.snail家族成员通过调控cdc-42和Rac1的表达,促进星型胶质细胞迁移;4.snail的表达与星形胶质细胞的EMT有关;5.壁虎脊髓中TGF-β促进snail家族成员的表达;6.snail家族成员在壁虎断尾脊髓再生中具有抑制损伤神经元凋亡的作用,激活P-Erk,P-Akt和BCL-XL介导的抗凋亡信号通路。