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miR164是植物中一个较为保守的miRNA家族，在拟南芥中有三个拷贝，能够通过调节靶基因NAC转录因子家族基因表达，进而调控胚胎细胞、营养器官和花器官的发育。研究发现miR164在番茄果实中大量表达，推测miR164可能对番茄果实发育具有重要的调控作用。迄今为止没有发现关于番茄miR164与果实发育相关的研究报道，因此克隆番茄miR164的前体且研究其与果实发育成熟的关系显的尤为重要。为了研究miR164在番茄果实发育及成熟过程中的功能，本研究克隆了番茄miR164的前体及其靶基因NAM，构建超表达载体并转化番茄。获得主要研究结果如下：（1）miR164的前体序列（pre-miR164）的分离与鉴定：根据miR164所在基因组的序列设计引物，克隆miR164的前体序列（pre-miR164）约500bp，生物信息学分析表明此序列可形成稳定的茎环结构。（2）miR164的表达模式分析：定量PCR分析miR164（pre-miR164）在番茄根、茎、叶、花和果实中的表达模式，结果表明miR164在各个组织中均有表达，其中在茎和果实中表达量最高。（3）miR164靶基因NAM的克隆及剪切位点突变：在番茄EST数据库中寻找靶基因NAM，设计引物，克隆得到1,315bp的片段，5′RACE结果显示miR164在第10个碱基处对NAM mRNA进行特异性剪切，从而确定NAM是miR164的靶基因；利用大引物突变法，对剪切位点的4个碱基进行了突变。（4）靶基因NAM表达模式分析：定量PCR分析NAM在番茄根、茎、叶、花和果实中的表达模式，结果表明NAM在各个组织中均有较强表达，其中在茎中表达量最高。（5）转基因植株表型分析：miR164超表达植株，在果实发育过程中花瓣不能正常脱落，且形成无籽果实。miR164共抑制和NAM超表达植株，萼片肥厚、融合，不能形成正常的花器官，果实无籽。NAM-M超表达植株，植株矮小、萼片肥厚、不能正常开花，果实无籽。（6）控制花器官形成关键基因表达情况分析：miR164超表达植株中，MADS-box家族关键基因AP1，AP3，TPI，TAG，TM6表达量均降低，而在NAM超表达植株中表达增强。（7）NAC转录因子下游基因的表达分析：miR164超表达植株中，KNOX、PTS、CUC2-LIKE、DBP和PDBP基因表达水平降低，而在NAM超表达植株中表达量增强。综上所述，miR164通过影响番茄花的形态建成及果实发育，在番茄花器官形成和果实发育过程中发挥着重要的作用。