花椰菜抗黑腐病相关基因的克隆及DNA甲基化分析

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本文对花椰菜抗黑腐病相关基因的克隆及DNA甲基化进行了研究。主要内容及结果如下: 1.利用同源序列候选基因法,在抗病系中得到一个330bp抗病基因同源序列RGA330-7,序列分析表明:RGA330-7与玉米抗病基因同源序列PIC17基因部分CDs有100%的同源性。 2.将NBS profiling方法引入花椰菜抗病基因的研究中,得到一个99bpRGA克隆NBS5-100。同源性分析表明:该片段与报道的小麦抗黄锈病基因同源序列NBS2,具有100%同源。 3.将NBS5-100和RGA330-7两个RGA推测的蛋白序列与7个已知植物抗病基因的蛋白序列进行比较,构建了分子进化树。聚类结果表明,本研究得到的两个RGA片段应属于non-TIR-NBS-LRR型。 4.利用cDNA-AFLP技术对致病菌胁迫的抗病系进行差异表达分析,得到一个抗病系差异表达的cDNA片段M6。 5.对花椰菜抗病和感病近等基因系基因组进行了ISSR分析。共选用了30条ISSR.引物,总共获得了310条清晰可辨的条带。得 6.利用AFLP和NBS profiling两种方法,以花椰菜品种间杂交F<,2>代为作图群体,构建了第一张花椰菜遗传图谱。 7.对未胁迫条件下花椰菜抗病和感病近等基因系总检测位点的甲基化水平以及同一位点甲基化水平进行了MSAP分析。 8.比较胁迫前后抗病和感病系总DNA甲基化和非甲基化位点的变化,结果显示抗病系胁迫前后的DNA甲基化水平的变化是甲基化位点减少,而非甲基化位点增加。 9.从抗病和感病系同一位点胞嘧啶甲基化状态的9种变化类型中,挑选出8个具有代表性的片段进行了序列分析。
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