【摘 要】
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埃及伊蚊是登革热和寨卡病毒病的主要媒介,验证埃及伊蚊感染登革热病毒（DENV）和寨卡病毒（ZIKV）外潜伏期是否存在差异,分析比较其外潜伏期的差异特征,为蚊媒病毒的监测和防控提供理论依据。本研究包含以下内容:埃及伊蚊的采集及实验室的驯化、病毒扩增及病毒检测体系的建立;埃及伊蚊细胞感染DENV和ZIKV后病毒复制情况的比较;埃及伊蚊感染DENV和ZIKV后病毒感染率及复制情况的比较;埃及伊蚊细胞和埃
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埃及伊蚊是登革热和寨卡病毒病的主要媒介,验证埃及伊蚊感染登革热病毒（DENV）和寨卡病毒（ZIKV）外潜伏期是否存在差异,分析比较其外潜伏期的差异特征,为蚊媒病毒的监测和防控提供理论依据。本研究包含以下内容:埃及伊蚊的采集及实验室的驯化、病毒扩增及病毒检测体系的建立;埃及伊蚊细胞感染DENV和ZIKV后病毒复制情况的比较;埃及伊蚊感染DENV和ZIKV后病毒感染率及复制情况的比较;埃及伊蚊细胞和埃及伊蚊组织mi RNA和m RNA的表达谱进行差异分析及功能分析。得到如下结果。本研究结果如下,（1）在同一实验条件下,埃及伊蚊Aag2细胞分别感染DENV-2和ZIKV时,ZIKV进入Aag2细胞的初始量比DENV-2高,在后续的几天时间里,ZIKV到达峰值病毒载量的时间早于DENV-2,在感染48h后,ZIKV病毒滴度就达到高峰,而DENV-2在实验的1～7天时间里,缓慢增长到峰值,直到接近ZIKV的病毒滴度水平。（2）在埃及伊蚊感染DENV-2和ZIKV后,埃及伊蚊感染ZIKV的外潜伏期要短于埃及伊蚊感染DENV-2的外潜伏期,且埃及伊蚊感染ZIKV后的病毒感染率及组织内的病毒载量比埃及伊蚊感染DENV后病毒感染率和组织内病毒载量高。（3）在埃及伊蚊细胞测序结果中,单独在登革病毒组表达的mi RNA有20个,在寨卡病毒组表达有差异的mi RNA有4个。在中肠组织中,6个mi RNA只在感染DENV的埃及伊蚊中肠内,14个mi RNA只在感染ZIKV的埃及伊蚊中肠内表达,在唾液腺组织中,35个mi RNA只在感染DENV的埃及伊蚊唾液腺内,30个mi RNA只在感染ZIKV的埃及伊蚊唾液腺内表达。埃及伊蚊中肠和唾液腺组织转录组差异基因表达分析发现,中肠组织样本中,单独在感染DENV-2的样本中表达的基因有285个,单独在感染ZIKV的样本中表达的基因有595个;在唾液腺组织样本中,单独在感染DENV-2的样本中表达的基因有891个,单独在感染ZIKV的样本中表达的基因有1620个。（4）对埃及伊蚊分别感染DENV-2、ZIKV后差异表达基因进行GO和KEGG富集分析,差异基因的表达主要在调控细胞代谢、细胞周期、凋亡及免疫反应等通路上,特别是膜的组成和膜的功能,例如细胞膜、内质网膜、高尔基体膜等。（5）对感染ZIKV及DENV-2的样本表达的差异基因进行q RT-PCR验证,结果表明q RT-PCR与RNA-seq结果一致。本研究得到以下结论（1）埃及伊蚊细胞感染DENV-2、ZIKV时,ZIKV复制的速度更快。（2）埃及伊蚊细胞感染DENV-2、ZIKV时,埃及伊蚊感染ZIKV的外潜伏期更短,且ZIKV在埃及伊蚊各个组织中感染率更高,病毒载量更高。（3）获得并分析了DENV-2、ZIKV感染埃及伊蚊细胞及埃及伊蚊中肠和唾液腺后m RNAs及mi RNAs表达谱,并对差异基因进行功能分析。（4）对DENV-2、ZIKV感染埃及伊蚊细胞及埃及伊蚊表达差异基因进行q RT-PCR验证,证实了测序数据的准确性。
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