论文部分内容阅读
FW-04-806是从土壤链霉菌Streptomyces sp．FIM-04-806发酵产物中分离获得的化合物，在前期的临床前研究中发现其具有较强的抗肿瘤活性。Sorafenib是多激酶抑制剂，是第一个也是唯一一个被多个国家批准用于治疗晚期肝癌的药物。本实验通过FW-04-806联合Sorafenib对人肝癌细胞抗增殖及抗侵袭转移能力的研究，以阐述FW-04-806联合Sorafenib抗肝癌增殖及侵袭转移的可能机制。 目的：观察不同浓度的 FW-04-806及联合 Sorafenib对人肝癌细胞 HepG2、SMMC-7721、QGY-7703、SK-Hep1细胞增殖、凋亡、周期进程、侵袭、转移及粘附的影响。 方法：以FW-04-8065、10、20、30、40、60、80μmol/L的浓度和Sorafenib2.5、5、10、20、40、80μmol/L浓度处理肝癌细胞，用MTT法测药物对肝癌细胞增殖的影响以及FW-04-806联合Sorafenib的联合指数；用高内涵检测FW-04-806单药及联合 Sorafenib对细胞凋亡的影响；用流式细胞仪检测 FW-04-806单药及联合Sorafenib对肝癌细胞周期阻滞的影响；利用Transwell小室及Metrigel胶体外检测药物对细胞的侵袭、迁移及粘附的影响。Western blot方法检测的 PARP、Cleaved-PARP、AKT、P-AKT、ERK1/2、P-ERK1/2、Vitmenin、N-cadhein、Slug、β-catenin及β-actin的表达。 结果：FW-04-806、Sorafenib作用肝癌细胞后对细胞增殖存在一定的抑制作用，且呈时间和浓度依赖关系，随着药物作用时间的延长IC50值降低，随着药物浓度增加，对肝癌细胞的生长抑制增加。FW-04-806联合Sorafenib对肝癌细胞有协同作用，各肝癌细胞株48h的联合指数均小于1。Western blot检测结果显示FW-04-806可抑制细胞周期相关蛋白表达，AKT、ERK1/2以及p-AKT、p-ERK1/2表达下降；FW-04-806单药及联合用药促进肝癌细胞凋亡，PARP蛋白表达随药物浓度增加或药物作用时间延长而降低，cleaved PARP蛋白表达随药物浓度增加或药物作用时间延长而增加；FW-04-806单药及联合Sorafenib对肝癌细胞株划痕愈合有抑制作用，随着浓度的增加愈合抑制率增大（p<0.01），药物联合组比单药组划痕愈合抑制率更明显；FW-04-806单药及联合Sorafenib对肝癌细胞株SK-Hep1侵袭转移相关蛋白Slug、Vitmenin、N-cadhein、β-catenin表达量下降。且呈剂量时间依赖性。FW-04-806单药及联合Sorafenib抑制肝癌细胞SK-Hep1的体外粘附，以及抑制对人工基底膜的侵袭、转移，且抑制作用均呈剂量依赖关系。 结论：FW-04-806通过抑制肝癌细胞的周期进程进而抑制细胞的增殖，促进了肝癌细胞的凋亡作用，通过抑制侵袭转移相关蛋白的表达从而对肝癌细胞侵袭转移有一定的抑制作用。FW-04-806联合Sorafenib加强了Sorafenib对人肝癌细胞的细胞毒性，与单独用药比加强抑制了人肝癌细胞SK-Hep1侵袭转移的发生发展。