论文部分内容阅读
目的：本研究旨在研究AchE在碘酸钠诱导的RPE及感光细胞凋亡中的表达情况，并探究AchE基因敲除与抑制剂对细胞凋亡的作用。方法：对C57BL/6小鼠尾静脉注射较高剂量NaIO3（50毫克/千克），分别在第6小时、第1天、3天、7天猝死取眼球进行蛋白印迹与免疫荧光。对小鼠分别灌胃给予不同剂量的多奈哌齐（0.5、2.5、12.5毫克/千克）预处理3天与不同剂量的柚皮苷（30、60毫克/千克）1天，NaIO3注射后持续给药3天，猝死小鼠取眼球进行蛋白印迹与免疫荧光。分别对AChE+/+和AChE+/-小鼠尾静脉注射较低剂量NaIO3（25毫克/千克），在第3天猝死取眼球进行蛋白印迹与免疫荧光。采用TUNEL标记感光细胞凋亡情况，免疫荧光技术观察Caspase3的表达情况，同时采用蛋白印迹技术检测AchE的表达情况。结果：较高剂量NaIO3注射显著诱导细胞凋亡，TUNEL染色发现注射后6小时即出现RPE凋亡，随后的感光细胞凋亡在第3天达到高峰，第7天有所回降。同时，蛋白印迹分析与免疫荧光结果表明AChE、Caspase3的表达也是显著升高的。AChE+/-碘酸钠注射组的TUNEL阳性细胞与AChE+/+碘酸钠注射组相比具有明显差异（P＜0.01）。与PBS灌胃组相比，给予乙酰胆碱酯酶抑制剂会显著降低凋亡细胞的程度（P＜0.01）。而且不同浓度之间具有统计学意义（P＜0.01）。免疫荧光显示在AChE基因敲除与抑制剂抑制凋亡的同时可见caspases-3的激活受抑。结论：AChE可能是个促凋亡因子，抑制AChE表达可减少感光细胞凋亡。AChE基因敲除与抑制剂主要抑制caspases-3的激活达到抑制凋亡的效果。总之，我们研究结果说明AChE抑制剂可能为将来临床上治疗视网膜退行性疾病提供一个思路。