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目的:研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)凋亡的影响及可能机制。
方法:1.培养并鉴定人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)。2.用不同浓度单核细胞趋化蛋白-1(0.1ng/ml,1.0ng/ml,10ng/ml,100ng/ml)对其作用48h后,用四氮唑盐(MTT)比色法观察细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染细胞流式细胞术观察内皮细胞凋亡;Rh123染色流式细胞术检测线粒体膜电势变化;Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM作用细胞,荧光分光光度计检测到细胞内Ca2+浓度变化;分光光度法检测细胞中Caspase-9的激活变化,以探讨MCP-1诱导hUVECs凋亡的可能机制。
结果:1.建立了人脐静脉血管内皮细胞株(CRL-1730)的培养方法,经免疫荧光vWF抗体鉴定为内皮细胞。2.单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)凋亡,MTT比色法显示细胞存活率降低,Annexin V-FITC/PI双染显示凋亡细胞增加,其效应随浓度的增加而增强。3.MCP-1作用hUVECs后,细胞内线粒体膜电势降低,细胞内Ca2+浓度升高,Caspase-9被激活。
结论:单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)凋亡,线粒体信号途径在hUVECs凋亡中发挥重要作用。