【摘 要】
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本研究从来源于北极的样品中筛选出一株β-半乳糖苷酶活性较高的菌株BSi20414,通过菌株形态、生理生化和16SrDNA研究,鉴定该菌株属于海单胞菌属(Marinomonas)。通过培养条件
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本研究从来源于北极的样品中筛选出一株β-半乳糖苷酶活性较高的菌株BSi20414,通过菌株形态、生理生化和16SrDNA研究,鉴定该菌株属于海单胞菌属(Marinomonas)。通过培养条件优化,确定了有利于BSi20414菌株产β-半乳糖苷酶的培养条件。
进一步对BSi20414菌株所产的β-半乳糖苷酶进行了纯化和酶学性质研究,经过硫酸铵沉淀和离子交换层析两步纯化,分离纯化出电泳纯的β-半乳糖苷酶,分子量约为76KDa。对纯化的β-半乳糖苷酶酶学性质进行了详细研究,其最适酶活温度为60℃,热稳定性好,最适酶活pH为6.0,酶在pH为5.0-8.0范围内比较稳定。动力学分析表明在60℃水解ONPG底物时,km为13.465mmol/L,Vmax为1.072umol/L·min。该酶在水解底物时表现了明显的糖苷键键型特异性,HPLC分析显示其能够降解β-1-3糖苷键,不能降解β-14和β-1-6糖苷键。
扩增BSi20414β-半乳糖苷酶基因全长,命名为galm基因。将galm基因序列分别连接到pET-22b(+)和PGEX-4T-1载体,分别构建表达载体pET-galm和PGEX-galm,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导,都获得了表达。
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