子痫前期（Preeclampsia，PE）是世界范围内导致孕产妇和围生儿高病率和死亡率的主要原因。尽管关于其研究层出不穷，其病因及发病机制并未得到确切地阐述，致使其治疗仍停留在对症治疗阶段，难以突破。　　调节性T细胞（Regulatory T cell，Treg细胞）是一类具有独特免疫调节功能的T细胞亚群，参与调节体内多种免疫细胞的活性和功能。近几年，随着对Treg细胞研究的深入，人们发现其在维持正常妊娠的过程中起着关键作用。国内外大量资料显示：Treg细胞数量和（或）功能的缺陷与不明原因性不孕、复发性流产、反复体外授精-胚胎移植失败和子痫前期的发生有密切关系。但有关PE中Treg细胞数量减少的原因及机制尚不是十分清楚，相关研究也很匮乏。　　IL-2是维持Treg细胞稳态和功能重要的细胞因子。研究表明，在PE中，外周Treg细胞较正常晚孕减少；但PE患者外周中Treg细胞表达Fas和Fas配体（FasL）水平无变化，而凋亡蛋白的水平发生了改变。这表明 Treg细胞可能发生了凋亡，但其凋亡的途径有所不同。近期有课题组以自身免疫疾病小鼠模型为研究对象，发现IL-2对Treg细胞数目影响是通过调节其凋亡蛋白水平的表达来实现的。我们推测子痫前期中Treg细胞数量减少的原因可能是其凋亡增加，且IL-2是调节其凋亡的重要因子。因此，本课题将以IL-2和Treg细胞为研究靶标，从体内研究和体外研究两个方向来解释PE中Treg细胞数量减少的原因及可能机制，为进一步阐述PE的发病机制和探索其新的治疗靶标提供科学依据。　　第一部分：在体检测循环中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡百分比　　目的：在体研究子痫前期患者和正常晚孕妇女外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞和的凋亡百分比。　　方法：以子痫前期患者为试验组，同期正常晚孕妇女为对照，在知情同意下，分别采集正常晚孕妇女（n=10）和子痫前期患者（n=7）外周血（肝素抗凝），采用密度梯度离心分离外周单个核细胞（PBMC），采用人Treg细胞磁珠分选试剂盒（阴性分选CD4+T细胞和阳性分选CD25+细胞两步法）分离PBMC中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞，采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡百分比。　　结果：与正常晚孕相比，子痫前期组CD4+CD25+T细胞早期凋亡百分比增加（P＜0.05），且晚期凋亡和总的细胞凋亡均明显增加（P＜0.01）；与正常晚孕组相比，子痫前期组CD4+CD25-T细胞早期、晚期和总的凋亡百分比均明显增加（P＜0.001）。　　结论：子痫前期患者外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡增加导致Treg细胞在循环中数量减少，进而导致免疫失衡参与子痫前期的发病。　　第二部分：IL-2对子痫前期患者外周CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡的影响　　实验一体外研究子痫前期表达IL-2的CD4+T细胞亚群百分比　　目的：检测PE和正常晚孕妇女外周血中CD4+CD25+IL-2+T细胞、CD4+CD25+Foxp3+IL-2+T细胞、CD4+CD25-IL-2+T细胞和CD4+CD25-Foxp3+IL-2+T细胞百分比。　　方法：采集正常晚孕妇女（n=5）和子痫前期患者（n=5）外周血（肝素抗凝），采用密度梯度离心分离PBMC，采用人Treg细胞磁珠分选试剂盒（阴性分选CD4+T细胞）分离PBMC中的CD4+T细胞，体外给予抗CD3和抗CD28单克隆抗体活化，Brefeldin A阻断IL-2的分泌，FITC-CD4 mAb、PE-CD25 mAb、APC-Foxp3mAb和Percp-Cy5.5-IL-2mAb标记，流式检测CD4+CD25-Foxp3-IL-2+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+IL-2+T细胞百分比。　　结果：与正常晚孕相比，子痫前期组CD4+CD25+IL-2+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+IL-2+T细胞百分比明显降低（P＜0.05）；而CD4+CD25-IL-2+T细胞和CD4+CD25-Foxp3+IL-2+T细胞百分比增加（P＜0.05）。　　结论：正常晚孕和子痫前期患者外周血中Treg细胞能产生IL-2；子痫前期Treg细胞凋亡增加可能与自身产生IL-2减少致其对凋亡的敏感性增加有关。　　实验二体外研究IL-2对循环中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞亚群凋亡的影响　　目的：体外研究IL-2对子痫前期患者和正常晚孕妇女外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡的影响。　　方法：采集正常晚孕妇女（n=5）和子痫前期患者（n=5）外周血（肝素抗凝），密度梯度离心分离外PBMC，采用人Treg细胞磁珠分选试剂盒（阴性分选CD4+T细胞和阳性分选CD25+细胞两步法）分离PBMC中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞，分别分为6组，依次为：①空白组、②IL-2组、③抗IL-2组、④IL-4组、⑤抗IL-4组和⑥抗IL-2+抗IL-4组，体外活化培养3天，采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡百分比。　　结果：与空白对照组相比，加入IL-2后，子痫前期和正常晚孕组中CD4+CD25+T细胞凋亡百分比无明显差异（P＞0.05）；加入抗IL-2后，子痫前期和正常晚孕组中CD4+CD25+T细胞凋亡百分比与相应空白对照组相比，也无统计学意义（P＞0.05）；但在正常晚孕组，在加入IL-2后，CD4+CD25+T细胞凋亡百分比减少，而在子痫前期组无此变化。加入IL-4和抗IL-4后，与空白对照组相比，子痫前期和正常晚孕组中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡百分比均无明显差异（P＞0.05）。结论：子痫前期患者外周血中CD4+CD25+T细胞加入IL-2后，细胞凋亡减少，但与正常晚孕相比，CD4+CD25+T细胞对IL-2的效应相对不明显，表明IL-2减少和Treg细胞本身受体表达下调可能是导致子痫前期外周血中Treg细胞凋亡增加的原因。而IL-2对CD4+CD25-T细胞作用不明显，表明CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞在体内发生凋亡的路径可能不一致。