胸腺是人体中枢免疫器官之一，是T细胞分化、发育、成熟的主要场所。因此，在淋巴系统发育和维持免疫系统的正常功能中起重要作用。近年来有学者认为，胸腺除了在免疫作用方面的中心地位外，还可能对机体神经-内分泌系统有影响。人体进入青春期以后，胸腺开始生理性萎缩，肿瘤、感染、免疫性疾病等发病率逐渐增高。大量研究表明小牛胸腺的提取物可辅助治疗肿瘤、感染及其他由于胸腺功能低下而引起的疾病。 胸腺组织的网状上皮细胞可产生多种胸腺激素，如胸腺肽、胸腺生成素、胸腺体液因子、淋巴细胞刺激因子、血清胸腺因子等。这些可溶性物质是构成胸腺微环境的主要因素，在T细胞分化和发育成熟过程中起重要的调节作用。近年国外学者将胸腺激素分为几种单独成分。由28个氨基酸组成的胸腺肽α1（thymosinalpha 1，Tα1）是胸腺激素的组成成分之一，属于胸腺肽第五组分，最初由Goldstein等分离。胸腺肽α1具有免疫调节作用，在体外可以促进致敏淋巴细胞分泌细胞因子，如IFN-α，IFN-γ，IL-2；促进高亲和力细胞因子受体的表达；调控骨髓前体细胞和脾细胞的末端脱氧核糖核酸转移酶活性；增强骨髓前体细胞的Thy1和Lyt1，2，3的表达；加速NK细胞的生成，增强NK细胞的活性；通过增强辅助T细胞的活性可以促进同种和/或自身淋巴细胞的反应；拮抗胸腺细胞成熟过程中的凋亡。体内应用结果也表明其在T细胞发育和功能重建中具有重要作用；可促进淋巴细胞分泌IL-2和表达IL-2受体；增强宿主的抗感染能力；促进机体清除病毒；增强免疫功能；有抗氧化；抑制癌细胞生长等重要作用。因此，胸腺肽α1具有增强宿主免疫功能、促进病毒消除和抑制癌细胞生长等重要作用。 临床上常应用于慢性乙型肝炎、丙型肝炎等病毒感染、肿瘤（如黑色素瘤、肺癌、白血病、鳞状上皮细胞癌和结肠癌等）、以及免疫缺陷病人的辅助治疗，效果较为显著。并可作为疫苗增强剂使用。因此，对其作用机制的研究将与其在传染病学、肿瘤学和免疫学领域中的应用密切相关。 目前，国内外对胸腺肽α1的研究多数集中在生物学功能和应用方面，并取得很大进展。但是对胸腺肽of的作川机制尤其是胸腺肽al作用于淋巴细胞后信号传导方面的报道却甚少。 首先，至今尚未克隆到胸腺肽al受体，因此对胸腺肽al受体知之甚少。目前仅有研究表明胸腺肽al可以和细胞表面的一些结构结合。如：Garaci等人用兔疫荧光法观察到小鼠淋巴细胞表面存在高亲和力的受体；MOOdy等人发现胸腺肽o可与 VIP（vasoactive intestinal pCptide）受体结合，但亲和力较低（IC50＝10u M），但胸腺肽 al又不是 VIP受体的拈抗剂，所以推测其是否存在另外的信号接受分子。尽管如此，至少说明存在一种分子可以与胸腺肽al 结合的分子，即胸腺肽。l结合蛋白（thymosin alphalbindng protein，TBP）。所以阐明胸腺肽 al结合蛋白，也就意味着可阐明其发挥生物活性作用的第一级信号接受分子，将对研究胸腺肽al受体，进而研究胸腺肽al的作用机制和进一步探索其功能产生重要影响。 其次，缺乏对胸腺肽al 引起的信号转导分子改变的相关报道。虽然，对胸腺肽al作用的第二信使研究有了一定的进展，但人类迄今尚未明确何种物质首先接受胸腺肽al的信息，并且有哪些分于参与传递胸腺肽al的信息，以及引起哪些信号分子的改变。 为研究胸腺肽al作用的分子机制，也为胸腺肽al的临床应用提供科学的实验依据，本研究利用酵母双杂交系统研究了胸腺肽al 结合蛋白，并利用基因芯片技术探讨Ta信号转导过程中信号分于的变化；对阐明Ta在免疫系统中的重耍作用及其潜在的抗衰老作用具有重要意义。同时对深入认识并合理干预Ta的信号转导过程，从而达到治疗各种相关疾病的目的具有重要的理论价值。并且，为发现新的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节的“靶点”奠定基础。 论文一酵母双杂交系统筛选胸腺肽al结合蛋白的初步研究 一、重组体 PGBKT7－T川的构建 为获取人Tal基因，根据文献报道用化学方法合成人Tal基因及其相应的引物，上游带有EcoR及起始密码子（ATG），下游带有BamH酶切位点和终止密码于（TAG）。经聚合酶链反应（PCR）技术扩增得到双链 Tal基因。以 EcoR、BamHI双酶切 pGBKT7载体（Clontech）和 Tal基因，酶切产物用 T4连接酶作粘端连接，得到pGBKT7－Tal重组体。以PCR和酶切方法筛选鉴定重组体，最后经测序证实Tol全序列已完整无误地插入p GBKT7载体。将其中的一个阳性重组体命名为PGT25。 二、鉴定诱饵蛋白无启动wS下游启动子转录报道基因的活性 2 为鉴定重组体PGBKT7－Toil（PGT25）本身是否会启动UAS下游的启动子表达下游基因的活性，小规模乙酸现酵母转化法将pGT25导入酵母AH109。转化菌铺于SD／TrP／X－a－gal的板上，7大后长出的均为白色克隆，证明重组体本身无启动UAS下游的启动于表达厂游基因的活性。大量扩?