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目的：探索使用两步灌流法分离培养原代正常大鼠肝细胞的条件和方法，研究牛磺酸对原代培养的正常大鼠肝细胞的毒性作用，以利用体外肝细胞模型建立药物肝毒性评价体系进行探索。
方法：(1)原代肝实质细胞使用经典的“两步门静脉胶原酶灌注分离法”进行分离，接种后贴壁培养，观察记录细胞生长状况，观察指标包括：台盼兰拒染法测定细胞活率、绘制细胞生长曲线。(2)牛磺酸对原代大鼠肝细胞毒性作用实验，包括直接加药法：测定药物的IC50，MTT比色实验测药物对细胞的生长抑制率，药物作用24h后测定培养液上清的AST、ALT、LDH、GSH、细胞内GSH的浓度，免疫组化TUNEL法测定细胞凋亡率(AI)；含药血清法：MTT法测定含5％、10％、15％、20％含药血清的培养液对细胞的生长抑制率的影响。(3)动物实验部分：牛磺酸静脉大剂量注射对大鼠肝、脾脏器系数的影响、对肝脾的病理改变，血清中AST、ALT、LDH、GSH及10％肝匀浆GSH的含量影响。
结果：(1)两步门静脉胶原酶灌注分离取得的肝细胞活率＞70％，24h内贴壁，生长良好，从生长曲线可看出培养第3天进入对数生长期；(2)直接加药法测得牛磺酸IC50为24.23mg/ml，MTT实验中细胞生长抑制率与剂量有正相关性，TUNEL实验细胞凋亡率测定，3个给药组AI分别为：3.71％、29.72％、42.56％。培养液上清AST、ALT显著升高，LDH含量上升，培养液上清和细胞内GSH含量均减少；含5％、10％、15％、20％含药血清的培养液对细胞的生长抑制率明显比直接加药法小；(3)体内实验中，动物肝、脾明显肿大，但病理切片显示肝脾结构和细胞损伤小，血清AST、ALT含量无明显变化，牛磺酸大剂量组血清LDH含量有显著降低，血清GSH，细胞内GSH含量略有降低，但无显著差异。
结论：两步门静脉胶原酶灌注分离法是个产量高，损伤小，细胞纯度高的分离原代正常大鼠肝细胞的方法；直接加药法实验中高浓度的牛磺酸对体外培养肝细胞有一定损伤，但血清药理学实验中牛磺酸对细胞的损伤较直接加药法小；动物体内实验中牛磺酸造成的肝脾损伤小。