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目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国癌症中的高发种类,仅次于胃癌和食管癌,5年生存率不足5%。miRNA通过对靶基因的表达调控,在肝癌发生发展过程中发挥重要作用。抑癌的(?)miRNA在肿瘤中表达下调,可能与其启动子区域的甲基化调控有关。前期研究表明,miR-639是在肝癌发生过程中发挥抑癌作用的miRNAs之一。本项研究的目的是为了阐明miR-639及其宿主基因TECR启动子的甲基化水平与启动子活性、下游基因表达及肝癌恶性程度之间的关系。方法、结果Real-time PCR方法检测到miR-639及其宿主基因TECR在Huh-7、 SK-Hep-1、SMMC-7721、LM-3、MHCC97-H、PLC/PRF/5该6种肝癌细胞系中的表达水平各不相同,但miR-639与TECR的表达正相关。还检测到去甲基化药物5-Aza可使Huh-7、SK-Hep-1、SMMC-7721、LM-3、MHCC97-H细胞中miR-639及TECR的表达回升,但对PLC/PRF/5细胞中两者的表达无明显影响。生物信息学的方法预测了miR-639及其宿主基因TECR共同的启动子,之后克隆了该启动子。pGL3/Luciferase报告系统检测到去甲基化药物可使Huh-7、SK-Hep-1、SMMC-7721、LM-3、MHCC97-H细胞中miR-639及TECR的启动子活性回升,但对PLC/PRF/5细胞中启动子活性无明显影响。pGL3/EGFP报告系统观察到了相同的结果。CpG岛预测网站预测到miR-639/TECR启动子区域内存在CpG岛,长230bp,含14个CpG位点。亚硫酸氢盐修饰测序法检测到6种肝癌细胞系中(?)miR-639/TECR启动子区域的甲基化程度不一,Huh-7、 SK-Hep-1、SMMC-7721细胞甲基化程度较高,LM-3、MHCC97-H细胞甲基化程度居中,5-Aza处理后甲基化位点均消失,PLC/PRF/5细胞无甲基化位点。亚硫酸氢盐修饰测序法发现5对肝癌组织标本中,癌旁组织miR-639/TECR启动子CpG岛内无甲基化位点,癌组织内存在甲基化,但程度不一。Real-time PCR方法检测到肝癌组织中miR-639及TECR的表达水平与甲基化程度及癌组织恶性程度负相关。集落形成实验发现miR-639及TECR均能抑制肝癌细胞的生长能力。结论肝癌发生过程中,miR-639及其宿主基因TECR启动子CpG岛内某些关键位点受甲基化调控发生表观遗传沉默,甲基化程度与启动子活性、miR-639/TECR表达呈负相关,与肝癌组织恶性程度呈正相关。为揭示miRNA的表达调控机制和肝癌的发生机制提供了一定了理论基础。