【摘 要】
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人骨唾液酸蛋白(BSP)可作为癌症骨转移、骨代谢疾病等疾病诊断的标志物。目前BSP检测方法主要依赖于ICH、RIA和ELISA法,市售原料及试剂盒较贵,未见BSP快速检测方法的报道。本
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人骨唾液酸蛋白(BSP)可作为癌症骨转移、骨代谢疾病等疾病诊断的标志物。目前BSP检测方法主要依赖于ICH、RIA和ELISA法,市售原料及试剂盒较贵,未见BSP快速检测方法的报道。本文从NCBI中查找人BSP基因序列,经过序列分析,合成BSP基因片段,利用PCR、酶切、连接、转化等技术构建BSP原核表达载体菌E.coli BL21-pET-15b-BSP。利用IPTG诱导BSP表达,经过对诱导条件的筛选,在20℃、150 r/min、0.8 mM IPTG、诱导6 h条件下大量表达可溶性蛋白,经过Ni-NTA纯化、透析袋浓缩得到纯度为96.3%、浓度为7.44mg/mL的BSP蛋白,经过SDS-PAGE分析重组BSP分子量约为37 kDa。利用市售BSP及多对抗体原料,通过建立的ELISA方法,筛选得到针对与本文重组BSP具有良好特异性、不同表位的高效抗体对,同时验证了本文制备的BSP具有良好的免疫原性。建立胶体金定性检测方法,灵敏度为100 ng/mL,重复性95%,4℃可保存10个月。本文得到了具有活性的重组人BSP,有望用作抗原原料;初步建立了BSP胶体金免疫层析快速半定量检测方法,为临床快速检测血清BSP提供了理论基础和技术保障。
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