论文部分内容阅读
神经元蜡样质脂褐素沉积病(neuronal ceroid lipofuscinoses，NCLs)是一组儿童常见的遗传性、进行性和致死性的中枢神经系统变性疾病。根据发病年龄、病程、超微病理改变可分4个主要的亚型，即婴儿型(CLN1/INCL)、晚发婴儿型(CLN2/LINCL)、青少年型(CLN3/JNCL)和成年型(CLN4/ANCL)，此外还包括数个地区性的变异型。NCLs主要临床症状相似，包括视力恶化，癫痫发作，智力障碍、运动失调和行为改变等。 晚发婴儿型神经元蜡样质脂褐素沉积病（Late Infantile Neuronal Ceroid Lipofuscinosis，LINCL）是由于编码三肽基肽酶1（TPP1）的CLN2/TPP1基因突变所致，为常染色体隐性遗传病。通常以2-4岁时癫痫发作、智力减退为首发表现，伴随而来的是运动共济失调、视力障碍、锥体系和锥体外系体征，患儿通常于10或20岁以内死亡。CLN2/TPP1基因定位于11p15，编码563个氨基酸残基。其编码蛋白TPP1在溶酶体内酸性环境中自动裂解为有活性的TPP1蛋白酶，能够特异地降解寡肽和蛋白质的N-末端而释放出三肽。CLN2/TPP1基因突变导致 TPP1酶活性缺失，造成线粒体 ATP合成酶的亚单位c在溶酶体内堆积，产生临床症状。 我们前期对一LINCL家系进行基因学研究发现两个突变点，包括错义突变c.646G>A和剪接供体突变c.1551+1G>A。前者国外已经报道过，后者由我们首先发现。本研究将对这一新发的突变进行功能学分析，明确该突变是否为致病性突变，并探讨它对转录和TPP1酶活性影响的可能作用机制。 研究对象和方法： 收集该LINCL家系的分子生物学检查资料，采集病人及其父母外周血标本，提取外周血总RNA，设计特异引物，用反转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测mRNA以及用干血片（dried blood spots，DBS）法检测TPP1酶活性。 结果： 1.RT-PCR检测显示发生c.1551+1G>A突变后，先证者及父亲的CLN2/TPP1基因发生异常剪接，测序显示mRNA缺失exon12。 2.TPP1酶蛋白活性分析显示先证者酶活性为0，c.1551+1G>A突变携带者的活性约为正常人下限的50％。 结论： 1.c.1551+1G>A突变为致病性突变，导致CLN2/TPP1基因发生异常剪接。 2.c.1551+1G>A突变TPP1蛋白活性为0，提示异常mRNA编码缺陷TPP1，导致酶活性完全丧失。