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壬基酚聚氧乙烯醚(NPEOs)作为一类主要的非离子表面活性剂,广泛应用于工业和农业的各个领域。NPEOs的生物降解产物,包括壬基酚(NP)、壬基酚单氧乙烯醚(NP1EO)、壬基酚二氧乙烯醚(NP2EO)、短链壬基酚聚氧乙烯酸(NP1EC,NP2EC),具有明显的雌激素效应。目前,常规培养方法分离得到的NPEOs降解菌主要属于γ-变形菌纲,尤其是假单胞菌属,这与环境调查的结果有较大差异。一些新培养方法能有效筛选难培养或不可培养菌株,本研究的目的是利用这些方法从活性污泥中筛选具有丰富遗传多样性的NPEOs降解荫,使用多种分析手段对其降解产物进行分析,并对其降解机制进行研究,取得了如下主要进展:
1.通过新培养方法,从长链NPEOs(NPav9EO,平均链长为9)长期驯化的活性污泥中筛得8株长链NPEOs降解菌株,菌株体现了高度的遗传多样性,分别属于变形菌门(包括α,β,γ亚纲)和厚壁菌门芽孢杆菌纲,包括7个属:Sphingomonas,Pseudomonas,Sphingobium,Cupriavidus,Achromobacter,Staphylococcus和Ralstonia,后面5个属还未见降解NPEOs的报道。这些菌株被分为4种降解类型:其中类型A产生短链NPEOs和短链NPECs;类型B的主要产物与A类似,但还生成了少量NP1EO和NP1EC;类型C的主要产物是NP1EO,几乎没有NPECs生成。类型D的降解产物只有对应链长的NPECs,而没有短链产物生成。其中类型C,D的降解途径还未见报道。
2.利用细胞提取物对NPEOs的降解实验表明,属于A,B两种降解类型的菌株对EO链的切割通过末端羟基转移一氧化途径完成。通过NPEO单体降解实验确认属于类型D的菌株缺乏切割EO链的能力,只能将其氧化为对应的NPEC。
3.筛选出4株短链NPEOs(NPav2EO,平均链长为2)降解菌,其降解模式与长链NPEOs降解类型C,D相似。属于类型C的菌株能够将NPavaEO转化为NP1EO;属于类型D的菌株能够降解NPav2EO生成NPECs和烷基端氧化产物CAPEC,揭示出环境中大量累积的NP1EO和CAPEC的生物转化机制。