论文部分内容阅读
第一部分沙利度胺对胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响目的研究沙利度胺(Thalidomide,THD)对胰腺癌细胞株SW1990细胞体外生长及血管生成的影响,并探讨其对人胰腺癌细胞株SW1990可能的作用机制。方法采用浓度为3.125、6.25、12.5、25、50、100、200和400μg/ml的THD处理人胰腺癌SW1990细胞,应用MTT法检测OD值,计算各实验组和对照组SW1990细胞的抑制率,并计算最适宜的沙利度胺IC50;取浓度为50、100、200μg/ml的THD处理人胰腺癌SW1990细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和VEGF的mRNA表达水平;免疫印迹法(Westen Blot)检测Bcl-2、Bax和VEGF的蛋白表达水平。结果(1)MTT法显示:THD可明显抑制SW1990细胞的生长,并随着药物浓度的增加和作用时间的延长而明显增强(P<0.05)。(2)流式细胞术显示:SW1990细胞经THD作用48小时后,细胞出现明显凋亡,且以早期凋亡为主。在50μg/ml浓度下早期凋亡率为(8.77±3.30)%,而在200μg/ml浓度下为(29.43±2.25)%,与THD浓度呈正相关;且随着药物浓度的增加,SW1990细胞G0/G1期比例上升,从(46.55±2.44)%上升到(58.83±2.33)%,S期细胞比例下降(P<0.05)。(3)RT-PCR检测Bcl-2、Bax和VEGF的mRNA表明:SW1990细胞经不同浓度THD作用48小时后,Bcl-2、VEGF的mRNA的表达呈浓度依赖性下降,Bax-mRNA的表达呈浓度依赖性增加,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)Western Blot结果显示:SW1990细胞经不同浓度THD作用48小时后,VEGF、Bcl-2蛋白表达呈浓度依赖性下降,Bax蛋白表达呈浓度依赖性升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论THD可抑制人胰腺癌SW1990细胞的生长,且呈时间和剂量依赖性,其机制可能是直接抑制肿瘤细胞增殖;阻滞细胞周期于静止期;诱导细胞早期凋亡;抑制血管生成。第二部分沙利度胺联合吉西他滨对人胰腺癌SW1990细胞生长的影响目的:探讨沙利度胺(Thalidomide,THD)联合吉西他滨(Gemcitabine,GEM)对人胰腺癌SW1990细胞的协同抑制作用及机制。方法以浓度为50μg/ml的沙利度胺联合20μmol/L的吉西他滨处理对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞,应用MTT比色法检测OD值,计算对照组和各实验组SW1990细胞的抑制率;AnnexinV/PI双染法检测SW1990细胞早期凋亡情况;RT-PCR检测细胞凋亡因子Bcl-2及Bax的mRNA表达水平;免疫印迹法(Westen Blot)检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果沙利度胺和吉西他滨都能有效地抑制人胰腺癌SW1990细胞增殖,二者联合作用具有协同效应;50μg/mlTHD作用SW1990细胞48h后细胞早期凋亡为(8.7±1.87)%,20μmol/LGEM组为(27.73±2.40)%,两者联合组为(39.4±3.24)%;RT-PCR检测抗凋亡因子Bcl-2-mRNA表达明显下降,促凋亡因子Bax-mRNA表达上升,各组与对照组及单药组与联合组比较均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降,促凋亡蛋白Bax表达上升,各组与对照组及单药组与联合组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论沙利度胺联合吉西他滨可明显抑制人胰腺癌SW1990细胞增殖,其机制可能是通过促进细胞凋亡而发挥作用。