【摘 要】
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真核生物中,核小体是染色质的基本组成单位。四种组蛋白H2A、H2B、H3、H4各两个拷贝组成核心组蛋白,147 bp DNA分子围绕核心组蛋白形成核心核小体结构;组蛋白H1与连接DNA分子相
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真核生物中,核小体是染色质的基本组成单位。四种组蛋白H2A、H2B、H3、H4各两个拷贝组成核心组蛋白,147 bp DNA分子围绕核心组蛋白形成核心核小体结构;组蛋白H1与连接DNA分子相互作用,进一步增强核小体结构的稳定性。核小体的结构变化与DNA复制、基因转录以及表观遗传等许多重要的生命过程直接相关,因此了解核小体组装过程的动力学特性对于研究生命本质具有十分重要的意义。由于传统生化技术的瓶颈,在研究核小体组装过程时,无法做到实时、动态地对单个分子的作用过程进行捕捉和分析,只能对一个时间点进行集合平均的分析,阻碍了深入了解核小体组装的动态本质。新兴的单分子技术基于能够实时动态观察单个生物大分子的优势,从而弥补了传统生化技术的这一不足。 本研究利用单分子全内反射荧光显微术(Total Internal ReflectionFluorescence Microscopy,TIRFM)观察酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)核小体在体外的组装过程,初步探讨了真核生物核小体的组装机制。我们通过提取酿酒酵母细胞核提取物(Yeast Nucleoplasmic Extracts,YNPE),获得了支持核小体体外组装的体外生化体系;通过单分子观察和大量数据统计和分析,初步解析了组蛋白八聚体和DNA之间的相互作用,形成核小体的过程。同时我们通过改进的单分子观察体系,获得酿酒酵母核小体体外组装的动力学过程。同时研究了古菌中推测的组蛋白类似蛋白:染色质结合蛋白Cren7和Sul7,分析了二者和DNA分子结合的不同动力学过程,对已有生化实验结果进行了有力的证实和补充。
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