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目的:探讨条件复制性溶瘤腺病毒H101在体外、体内对视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)生长的影响及作用机制。
方法:通过RT-PCR、western blot、免疫细胞化学以及免疫荧光的方法检测RB细胞表面科萨奇-腺病毒受体(coxsackievirus-adenovirus receptor,CAR)的表达情况;并用不同滴度的、表达绿色荧光蛋白的腺病毒(AdGFP)感染HXO-RB44细胞,以确定腺病毒在体外对RB的最佳感染复数;用CCK-8试剂盒检测H101在体外对RB细胞的杀伤作用;终点稀释法及real-time PCR法检测H101在RB细胞中的复制情况;流式细胞术检测H101对RB细胞凋亡和周期的影响。将HXO-RB44细胞注射入NOD-SCID鼠皮下,构建移植瘤模型后,分别用H101、AdGFP和PBS进行瘤内多点注射,记录荷瘤鼠肿瘤体积及生存时间。免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)和western blot法分别检测腺病毒纤毛蛋白和六邻体蛋白的表达以评估H101在RB移植瘤内的复制情况。
结果:HXO-RB44表面表达CAR,并对腺病毒感染敏感;H101可在RB细胞内大量复制增殖,引起RB细胞裂解死亡及G2/M期阻滞,但不诱导早期凋亡;与对照组相比,H101显著抑制了RB细胞生长(P<0.01),明显减小荷瘤鼠的肿瘤体积并延长生存期(P<0.01);IHC和western blot结果显示H101在瘤体内大量复制表达。
结论:H101主要通过直接溶瘤和周期阻滞的方式,在体外、体内有效抑制RB生长,有望作为治疗RB的新方法。