【摘 要】
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暗纹东方鲀(Takifugu obscurus),属硬骨鱼纲(Osteichthyes),鲀形目(Tetraodontiformes),鲀亚目(Tetraodontoidei),鲀科(Tetraodontidae),东方鲀属(Takifugu),对淡水适应性好,是河鲀
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暗纹东方鲀(Takifugu obscurus),属硬骨鱼纲(Osteichthyes),鲀形目(Tetraodontiformes),鲀亚目(Tetraodontoidei),鲀科(Tetraodontidae),东方鲀属(Takifugu),对淡水适应性好,是河鲀中最具开发潜力的一种,营养丰富,兼具药用和食用价值,养殖前景广泛,是我国重要的养殖鱼类之一。暗纹东方鲀是仅次于鲨鱼的富含肝油的鱼类,肝脏含油率达50~60%,含有丰富的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFA)。
本论文以人工养殖的暗纹东方鲀为研究对象,通过尿素包合方法富集暗纹东方鲀肝脏鱼油中多不饱和脂肪酸,并检测包合产物中DHA含量。检测结果显示,经过一次尿素包合之后产物中DHA含量达到11.7%,表明包合效果良好。同时,通过体外细胞培养干预实验,对不同浓度多不饱和脂肪酸对肝癌细胞Hep-G2生长进行了探讨。倒置相差显微镜下观察到细胞形态学发生显著地改变,且这种影响随着浓度的增加而增大。
用MTT法检测细胞活力的变化,多不饱和脂肪酸能显著抑制Hep-G2细胞增殖,并且呈剂量依赖性,当用30μg/ml、100μμg/ml、300μg/ml和1000μg/ml的多不饱和脂肪酸处理Hep-G2细胞后,抑制率分别为4.593%、28.173%、53.766%和95.639%,并且有显著性差异。
Annexin-V-FITC/PI双染后用流式细胞仪检测不同浓度尿素包合多不饱和脂肪酸(对照、100、300和1000μμg/ml)作用于Hep-G2细胞24h后,其凋亡比率分别为3.02%、20.12%、26.20%、49.36%,统计数据显示各实验组与对照组之间存在统计学差异(p<0.05),呈明显的浓度依赖性。
PI单染检测多不饱和脂肪酸对Hep-G2细胞周期的影响,早期凋亡率和晚期凋亡率都呈明显的药物浓度依赖性,各实验组与对照组之间统计结果有差异性(p<0.05);各组(对照、100μg/ml、300μg/ml和1000μg/ml)总凋亡率分别为3.017%、20.123%、26.197%、49.360%,统计数据显示各实验组与对照组之间存在统计学差异(p<0.05),呈明显的药物浓度依赖性。
综上所述,尿素包合多不饱和脂肪酸在体外显著抑制人肝癌细胞Hep-G2的增殖,且呈现剂量效应;尿素包合多不饱和脂肪酸可诱导肝癌细胞Hep-G2的凋亡,诱导凋亡作用主要是阻滞细胞周期的S期。
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