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目的 水通道蛋白(AQPs)广泛存在于各种组织和细胞中，它最基本的功能是维持细胞内外水环境的稳定，最先发现的AQP1是目前分布最广的一种AQPs，最近研究显示它尚与H2O2向细胞内转运相关。氧自由基(ROS)是需氧细胞在代谢过程中产生一系列活性氧簇，生物学上最重要的是O2(.)-和H2O2。细胞能量代谢发生障碍时可导致ROS大量产生，既然AQP1可将细胞外H2O2转运至细胞内，我们猜测它是否也可以将细胞内大量产生的ROS转运出细胞呢？本实验的主要目的既是通过特异性siRNA转染抑制AQP1表达，再予能量代谢抑制剂处理后检测细胞内ROS水平变化及予外源性H2O2刺激细胞后检测AQP1表达，初步探索AQP1对内源性ROS转运的影响。 方法 1、实验分三组:AQP1-RNAi为特异性靶向AQP1的siRNA转染的细胞;control-RNAi为非特异性靶向AQP1的siRNA转染的细胞;normalcell，为正常细胞，分2个亚组。westernblot检测转染后AQP1蛋白表达量;AQP1-RNAi、control-RNAi、normalcell三组分别加入碘乙酰胺(30μM)孵育0、4、6小时，装载DCFH-DA探针，另外一组normalcell作为空白对照，酶标仪检测ROS荧光值。 2、应用寡霉素(40μM)作用于Balb/c3T3成纤维细胞，分别孵育0、2、4小时，装载DCFH-DA探针，酶标仪检测ROS荧光值。 3、应用H2O2(125μM)作用于Balb/c3T3成纤维细胞，分别孵育0、1、3、5小时，westernblot检测AQP1蛋白量。 结果 1、利用RNAi转染技术抑制Balb/c3T3成纤维细胞AQP1表达，westernblot验证AQP1蛋白表达量。AQP1-RNAi组AQP1表达较normalcell组减少63.9％，control-RNAi组较normalcell组减少20.3％。 2、细胞中加入碘乙酰胺(30μM)后孵育0、4、6小时，装载DCFH-DA探针，应用酶标仪检测荧光值，AQP1-RNAi、control-RNAi、normalcell三组加入碘乙酰胺4、6小时ROS数量均明显增加，与0小时对比有统计学差异;而AQP1-RNAi组与control-RNAi、normalcell两组于不同时间对比ROS升高更为显著，差异有统计学意义;normalcell+DCFH-DA与normalcell组对比明显统计学差异。 3、应用寡霉素(40μM)作用于Balb/c3T3成纤维细胞后2、4小时较0小时对比，细胞内ROS水平明显升高，差异有统计学意义。 4、应用H2O2(125μM)作用于Balb/c3T3成纤维细胞后1、3、5小时较0小时对比AQP1蛋白表达量未见明显改变。 结论 AQP1参与了内源性氧自由基的转运。