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本文以大叶栎(Castanopsis fissa(Champ.) Rchd.et.Wils.)新生萌芽条为试材,从无菌体系建立、继代增殖、生根诱导、愈伤组织诱导与分化、移栽等环节进行研究,探索大叶栎组织培养技术,培育出大叶栎组织培养无菌苗,建立大叶栎离体再生体系,提出合理完善的大叶栎继代增殖、诱导生根、无菌苗移植方法,为大叶栎工厂化育苗提供科学完善的理论基础,研究结果表明:
(1)大叶栎富含单宁类多酚物质,茎段多酚类物质含量约为2%-3%,且顶位茎段多酚类物质含量>中位茎段>基部茎段,多酚类物质含量与初代诱导褐变死亡率显著正相关,相关系数为0.899。
(2)大叶栎离体组织培养最适外植体为新生萌芽条中位芽,多酚类含量低,为2%,褐变死亡率小,为20%,诱导分化率最高。
(3)预处理的外植体经75%酒精表面消毒30s,无菌水冲洗2次,0.3%HgCl2灭菌6min,无菌水冲洗4次,可达良好的消毒效果。
(4)最适大叶栎初代诱导培养基为:1/2MS I+2g/L活性炭+0.3 mg/L抗坏血酸+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L,活性炭吸附剂与抗坏血酸等褐变抑制剂,可有效的降低褐变死亡率;0.5mg/L6-BA与0.5mg/L NAA是初代培养最好的激素配比,腋芽分化最好。
(5)1/2MS I+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L或1/2MS I+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+IBA0.5mg/L或1/2MS I+6-BA0.5 mg/L+NAA0.1mg/L为适合继代增殖诱导的培养基,能很好的促进不定芽的增值。
(6)最适生根诱导培养基为1/2MS I+NAA1.0mg/1+IBA1.0mg/L,生根率高达84.62%,苗木质量好,且根从茎段基部长出,容易成活。
(7)以叶片为外植体诱导愈伤组织有三种:绿色,疏松型;浅黄褐色,略透明,疏松型;白色,致密型;而以茎段基部愈伤组织为外植体诱导的愈伤组织为黄褐色致密型,在附加6-BA1.0+NAA0.1+IBA0.1、6-BA5.0+NAA0.1+IBA0.1、GA35.0+NAA0.1、GA35.0的培养基上分别诱导出无根苗,在6-BA1.0+NAA0.1+IBA0.1、GA35.0培养基上分化出叶。