【摘 要】
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肿瘤的发生及转移是一个多阶段、多步骤、多基因参与的过程.近年肿瘤分子生物学的研究重点已转入克隆和鉴定调控肿瘤发生及转移表型的基因,从而为肿瘤的预防和治疗提供理论依
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肿瘤的发生及转移是一个多阶段、多步骤、多基因参与的过程.近年肿瘤分子生物学的研究重点已转入克隆和鉴定调控肿瘤发生及转移表型的基因,从而为肿瘤的预防和治疗提供理论依据.该研究应用Northern blot分析了共22种常见肿瘤细胞系,采用RT-PCR的方法分析了33例非小细胞肺癌临床手术标本的肿瘤原发灶、淋巴结转移灶及癌旁正常组织标本中GB14基因的表达情况,确定了GB14基因与多种肿瘤的发生有关,亦与非小细胞肺癌的转移有关.检测启动子活性的萤火虫荧光素酶分析及CpG岛的Southern印迹甲基化分析结果表明:GB14基因转录起始位点上游存在5个GC box,均具有启动子活性,尤其第3、4个GC box启动子活性最强.而且GB14基因启动子区及第1外显子内存在一个2292bp的CpG岛,甲基化敏感的Southern印迹杂交显示限制性内切酶MspⅠ和HpaⅡ酶切位点处无甲基化修饰,但不排除其他位点甲基化的可能.通过构建GB14基因正义真核表达载体,采用细胞转染的方法,将构建的重组体转入AGZY83-a和NIH3T3中,通过体外细胞培养,普通光镜、电子显微镜、流式细胞计数仪、绘制细胞生长曲线、MTT比色法和细胞侵袭及趋化运动实验等体外试验方法,证实了GB14基因正义真核表达载体转染使转染后的AGZY83-a和NIH3T3细胞的细胞增殖受到抑制,但使其侵袭及趋化运动能力增强.并且首次通过构建融合蛋白并结合细胞组化的方法将GB14蛋白定位于胞浆和膜内区.另外,对GB14基因和RAB5A基因的相互作用研究显示:二者的表达呈现相同的趋势,提示GB14基因有可能在物质的跨膜运输及信号传导等方面发挥作用.根据以上结论,我们认为GB14基因是一个与肿瘤发生和转移有关的新基因,它的功能改变可能是肿瘤相关分子机制中的重要环节.
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