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研究背景及目的： 原发性肝癌是严重危害人类健康的疾病之一,复发和转移是肝癌患者预后差、死亡率高的主要原因。它的发生、发展是一个多阶段的过程,涉及多个基因的改变。目前缺乏行之有效的早期诊断和防治措施。阐明其分子发病机制和致病基因,对于开发新的诊疗措施至关重要。现有研究表明,在肝癌的发生、发展过程中存在着多种抑癌基因CpG岛的异常甲基化现象,干扰抑癌基因的表达,导致细胞异常增殖,引起起细胞癌变。 本研究通过对不同肝癌细胞株中TIMP-3mRNA的表达及其CpG岛甲基化状态的检测,初步分析TIMP-3基因甲基化水平对mRNA表达的影响。并使用去甲基化药物5-杂氮-2’脱氧胞苷对甲基化阳性的细胞株进行干预,观察该药物对肝癌细胞株中TIMP-3基因表达及其CpG岛甲基化程度的影响。 方法： 运用荧光定量PCR检测12例肝癌癌旁组织及8株肝癌细胞系中TIMP-3表达情况。使用MSP定性检测8株肝癌细胞株、25例肝癌组织及23例癌旁组织中TIMP-3CpG岛甲基化状况。使用去甲基化药物5-杂氮-2’脱氧胞苷对甲基化阳性的细胞株进行干预,观察干预组与对照组TIMP-3基因表达差异,并使用焦磷酸测序技术定量检测CpG岛甲基化差异。 结果： 研究发现8株肝癌细胞中TIMP-3mRNA表达均显著低于肝癌旁组织(P<0.01)。而且在8株肝癌细胞系中有C3A、Hep-3B、HepG23株检测到TIMP-3CpG岛甲 基化阳性,经去甲基化药物干预后,经去甲基化药物干预后,在这3株肝癌细胞中均发现TIMP-3mRNA的表达较对照组有明显上调(P<0.05),CpG岛的甲基化率下降(P<0.05)。在25例肝癌组织中有9例出现了甲基化(36％),23例癌旁组织中有5例出现了甲基化(21.7%),两者比较无统计学差异(P=0.349)。 结论： TIMP-3启动子区域CpG岛甲基化是其在肝癌细胞株中表达降低的原因之一,而且甲基转移酶抑制剂能显著降低肝癌细胞株TIMP-3CpG岛甲基化程度及上调TIMP-3mRNA的表达。